PENGARUH PROTEKSI VITAMIN C TERHADAP KADAR

500mg/kg dan 1000mg/kg) secara oral sekali sehari selama tujuh hari. Mencit kemudian diberi Pb asetat (20 mg/kgBB) secara intraperitoneal pada hari ke...

0 downloads 31 Views 2MB Size
PENGARUH PROTEKSI VITAMIN C TERHADAP KADAR UREUM, KREATININ DAN GAMBARAN HISTOPATOLOGIS GINJAL MENCIT YANG DIPAPAR PLUMBUM

TESIS

Oleh

BERNIKE DOLOKSARIBU 067008003/BM

K O L A

S

C

N

PA

A

S

H

E

A S A R JA

SEKOLAH PASCASARJANA UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN

2008

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

PENGARUH PROTEKSI VITAMIN C TERHADAP KADAR UREUM, KREATININ DAN GAMBARAN HISTOPATOLOGIS GINJAL MENCIT YANG DIPAPAR PLUMBUM

TESIS

Untuk Memperoleh Gelar Magister Kesehatan dalam Program Studi Ilmu Biomedik pada Sekolah Pascasarjana Universitas Sumatera Utara

Oleh

BERNIKE DOLOKSARIBU 067008003/BM

SEKOLAH PASCASARJANA UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN 2008

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Judul Tesis

: PENGARUH PROTEKSI VITAMIN C TERHADAP KADAR UREUM, KREATININ DAN GAMBARAN HISTOPATOLOGIS GINJAL MENCIT YANG DIPAPAR PLUMBUM Nama Mahasiswa : Bernike Doloksaribu Nomor Pokok : 067008003 Program Studi : Ilmu Biomedik

Menyetujui Komisi Pembimbing :

dr. Datten Bangun, M.Sc.Sp.FK Ketua

Ketua Program Studi,

(dr. Yahwardiah Siregar, Ph.D.)

( dr.H. Delyuzar, Sp.PA ) Anggota

Direktur,

(Prof. Dr. Ir. T. Chairun Nisa B.,M.Sc.)

Tanggal lulus: 19 September 2008

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Telah diuji pada Tanggal 19 September 2008 ____________________________________________________________________

PANITIA PENGUJI TESIS Ketua : dr. Datten Bangun, M.Sc., Sp.FK Anggota : 1. dr. H. Delyuzar, Sp.PA 2. Prof. Dr. Burhanuddin Nasution, Sp.PK 3. Mahdiah, DCN, M.Kes

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

ABSTRAK

Plumbum (Pb) adalah logam berat yang termasuk dalam kelompok B3 ( yang berbahaya dan beracun ) yang terdapat dalam kehidupan kita sehari-hari. Plumbum terdapat secara luas di lingkungan. Pb di lingkungan kebanyakan berasal dari pembakaran bahan bakar minyak kendaraan bermotor dan industri. Pb banyak terdapat di biosphere dan diketahui sebagai nephrotoksik. Orang dewasa dan anakanak dapat terpapar oleh plumbum melalui makanan, udara dan air. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui Pengaruh proteksi vitamin C pada ureum, kreatinin dan gambaran histopatologi ginjal mencit yang dipapari plumbum. Penelitian ini adalah merupakan studi eksperimental laboratorium dengan uji Mann Whitney Study. Sebanyak 30 ekor mencit jantan ( Mus musculus L ) strain DDW ( Double Distsch Webster ) di bagi dalam 5 kelompok perlakuan yang masingmasing terdiri atas 6 ekor mencit jantan. Untuk itu mencit dibagi dalam kelompok kontrol (aquadest dan Pb asetat) dan kelompok perlakuan. Kelompok perlakuan adalah kelompok yang diberi proteksi vitamin C dalam tiga dosis (200 mg/kgBB, 500mg/kg dan 1000mg/kg) secara oral sekali sehari selama tujuh hari. Mencit kemudian diberi Pb asetat (20 mg/kgBB) secara intraperitoneal pada hari ke tujuh satu jam setelah pemberian vitamin C. Dua hari kemudian dilakukan pengambilan darah dan organ ginjal kemudian dilakukan pemeriksaan untuk menilai kadar ureum, kreatinin dan perubahan pada gambaran histopatologi ginjal mencit. Diperoleh hasil bahwa pemberian Pb 20 mg/kgBB dosis tunggal tidak mempengaruhi kadar ureum dan kreatinin. Namun gambaran histopatologi ginjal dengan dosis tersebut sudah menunjukkan kerusakan yang bermakna. Sedangkan untuk proteksi vitamin C dengan dosis 500mg/kgBB dapat menurunkan kadar ureum. Dan pemberian vitamin C 200 dan 500 mg/kgBB dapat menurunkan kadar kreatinin. Pada pemeriksaan histopatologis menunjukkan vitamin C 1000 mg merupakan pelindung ginjal terbaik untuk tidak terjadinya perdarahan intertubuler, degenerasi dan nekrosis bila dibandingkan dengan dua dosis vitamin C lainnya. Kata kunci: Plumbum, ginjal, vitamin C, ureum, kreatinin

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

ABSTRACT

Lead ( Pb ) acetate is a heavy metal classified as a B3 group ( that means it is dangerous & poisonous ). It is used and found in daily life. Lead is a ubiquitous element detected in all environmental media. Lead intake in adults and children mostly from foods, air and water. The majority of lead in the environment arises from burning fossil fuels in automobiles, and industrial emissions. Lead occurs widely in the biosphere and is found to be a potent nephrotoxic. This study was performed to investigate the protective role of vitamin C (ascorbic acid) against lead acetate intoxication in mice as measured by ureum, creatinine and renal histology. This is a laboratory experimental study, the results were analysed with the Mann Whitney Test. A group of 30 mice (Mus musculus) strain Double Distsch Webster ( DDW ) was divided into five groups. Mice were randomized into control (aquadest and lead acetate) and experimental groups. Mice of the experimental groups were administered vitamin C in 3 doses (200 mg/kgBW, 500 mg/kgBW and 1000 mg/kg BW ) orally once a day for 7 consecutive days. Mice were then treated with lead acetate (20 mg/kgBW intraperitoneally) on the 7th day, one hour after vitamin C administration. Two days afterward, the mice were sacrificed. Blood was taken intracardially and analyzed for ureum and creatinine levels . The kidney was examined histologically. The results indicated that administration of vitamin C at 500 mg/kgBW reduced ureum levels in plasma but not to a statistically significant level. Administration of vitamin C at 200 and 500 mg/kgBW reduced creatinine plasma levels. Histologically, lead produced damage to the kidney like necrosis, degeneration and intertubuler haemorrhage bleeding ( control lead acetate group ). Vitamin C at 1000mg/kgBW protected the kidney from this damage as compared to the quantitive and qualitative renal changes observed in the other two vitamin C treatment groups. Key words: Lead, kidney, vitamin C, ureum, creatinine

ii Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa atas berkat dan karuniaNya penulis dapat menyelesaikan penelitian dengan judul, “Pengaruh Proteksi Vitamin C TerhadapKadar Ureum,Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum “. Tesis ini merupakan salah satu syarat yang harus dilaksanakan penulis dalam rangka memenuhi persyaratan untuk meraih gelar Magister pada Sekolah Pascasarjana Universitas Sumatera Utara. Dengan selesainya tesis ini perkenankanlah penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada: Rektor Universitas Sumatera Utara, Prof. dr. H. Chairuddin P. Lubis, Sp.A(K) dan seluruh jajarannya yang telah memberikan kesempatan pada penulis untuk mengikuti pendidikan di Sekolah Pascasarjana USU Medan. Direktur Sekolah Pascasarjana USU Medan, Prof. Dr. Ir. T. Chairun Nisa B, M.Sc dan Ketua Program Studi Ilmu Biomedik dr. Yahwardiah Siregar,Ph.D., atas kesempatan, fasilitas dan dorongan yang diberikan kepada penulis untuk mengikuti dan menyelesaikan pendidikan program magíster di Sekolah Pascasarjana USU Medan. Terima kasih yang tidak terhingga dan penghargaan setinggi-tingginya penulis sampaikan kepada dr. Datten Bangun, M.Sc., Sp.FK sebagai ketua komisi

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

pembimbing dan dr. H. Delyuzar, Sp.PA (sebagai anggota komisi pembimbing) serta Prof.Dr. Burhanuddin Nasution,Sp.PK dan Mahdiah, DCN, M.Kes (sebagai komisi pembanding) yang

dengan penuh perhatian memberikan dorongan, bimbingan,

semangat, bantuan serta saran-saran yang bermanfaat kepada penulis dari persiapan penelitian sampai pada penyelesaian tesis ini. Terima kasih juga disampaikan kepada semua dosen yang telah membimbing penulis selama mengikuti program magister ini. Pada kesempatan ini secara khusus terima kasih kepada Direktur Poltekkes Medan, Ir. Zuraidah Nasution, M.Kes dan Ketua Jurusan Gizi, Dra.Ida Nurhayati, M.Kes yang telah memberikan izin kepada penulis untuk mengikuti pendidikan magister di Sekolah Pascasarjana USU Medan. Persembahan terima kasih yang tulus, rasa hormat dan sembah sujud kepada ayahanda ( H.Doloksaribu (alm) dan ibu E br.Pardosi ) yang telah membesarkan dengan penuh kasih sayang dan dengan jasa mereka penulis dapat menjalani pendidikan hingga pascasarjana. Kepada bapak dan ibu mertua ( St.Prof.Drs.D.Manurung dan Raden Ayu Moersyarah Djenadini ), suamiku tercinta St. M.Manurung, SE, ananda tersayang Yudith Andini, Alexander Nikita dan Dian Michael, tiada kata yang setara untuk mengutarakan terima kasih dan penghargaan setinggi-tingginya atas cinta, kasih sayang, pengertian, pengorbanan, kesabaran dan dorongan serta doa yang diberikan kepada penulis. Serta seluruh keluarga yang telah memberikan dukungan moril dan materil selama penulis menjalani pendidikan di Sekolah Pascasarjana.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Terima

kasih

juga

penulis

sampaikan

kepada

seluruh

teman-teman

seperjuangan, mahasiswa Pascasarjana USU Program Studi Ilmu Biomedik angkatan 2006 atas segala kerjasama dan kekompakan yang telah terjalin selama ini. Terima kasih atas dua tahun yang indah dan penuh kenangan. Kepada seluruh pihak yang telah membantu selama penulis mengikuti pendidikan ini tak lupa penulis sampaikan rasa terima kasih yang tidak terhingga. Akhirnya, penulis menyadari bahwa hasil penelitian ini masih jauh dari sempurna. Oleh karena itu penulis berharap adanya kritik dan saran yang membangun demi perbaikan tulisan ini. Semoga penelitian ini dapat bermanfaat bagi kita semua.

Medan, 19 September 2008 Penulis,

(Bernike Doloksaribu) NIM : 067008003

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

RIWAYAT HIDUP 1. Nama

: Bernike Doloksaribu

2. Tempat/Tanggal Lahir : Lubuk Pakam, 26 Desember 1968 3. Agama

: Kristen Protestan

4. Status

: Menikah

5. Alamat

: Jl. Bahagia By Pass No. 1 Medan

6. Telp/HP

: 061-7862738/081396708279

7. Pendidikan SD Kristen VIII Medan

: 1975 – 1981

SMP Negeri VII Medan

: 1981 – 1984

SMA Negeri V Medan

: 1984 – 1987

Sekolah Pembantu Ahli Gizi (SPAG) Persagi Lubuk Pakam

: 1987 – 1988

Akademi Gizi Jakarta

: 1994 – 1996

Akta III, IKIP Medan

: 1998 – 1999

D-IV Gizi Klinik FK Universitas Brawijaya Malang: 1999 – 2000 Sekolah Pascasarjana, Program Biomedik, USU

: 2006 – 2008

8. Riwayat Pekerjaan Pengatur Gizi Rumah Sakit Umum Herna Medan

: 1988 – 1989

Staf SPAG Dep Kes RI Lubuk Pakam

: 1989 – 1991

Staf Pengajar Tetap di Akademi Gizi Lubuk Pakam : 1991 – sekarang

vi

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

DAFTAR ISI Halaman ABSTRAK ................................................................................................................. i ABSTRACT............................................................................................................... ii KATA PENGANTAR ............................................................................................... iii RIWAYAT HIDUP.................................................................................................... vi DAFTAR ISI.............................................................................................................. vii DAFTAR TABEL...................................................................................................... x DAFTAR GAMBAR ................................................................................................. xi DAFTAR LAMPIRAN............................................................................................. xii BAB I PENDAHULUAN .......................................................................................... 1 1.1 Latar Belakang ........................................................................................... 1 1.2 Perumusan Masalah ................................................................................... 6 1.3 Kerangka Teori .......................................................................................... 6 1.4 Tujuan Penelitian ....................................................................................... 7 1.5 Hipotesis..................................................................................................... 8 1.6 Manfaat Penelitian ..................................................................................... 8 BAB II TINJAUAN PUSTAKA............................................................................... 9 2.1 Plumbum (Pb) ............................................................................................ 9 2.1.1 Gambaran Umum ........................................................................... 9 2.1.2 Metabolisme Pb.............................................................................. 11

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

2.1.3 Toksisitas Pb .................................................................................. 14 2.1.4 Efek Plumbum Pada Ginjal............................................................ 17 2.1.5 Radikal Bebas dan Anti Oksidan ................................................... 18 2.2 Ginjal.......................................................................................................... 21 2.2.1 Anatomi Umum.............................................................................. 21 2.2.2 Gambaran Histologi ....................................................................... 22 2.3 Pemeriksaan Biokimia Ginjal ................................................................... 24 2.3.1 Ureum............................................................................................. 24 2.3.2 Kreatinin......................................................................................... 25 2.4 Biologi Mencit ........................................................................................... 26 BAB III METODOLOGI PENELITIAN.................................................................. 28 3.1 Desain Penelitian........................................................................................ 28 3.2 Tempat dan Waktu Penelitian ................................................................... 28 3,3 Rancangan Penelitian ................................................................................. 28 3.4 Populasi Penelitian..................................................................................... 29 3.5 Sampel Penelitian....................................................................................... 29 3.6 Variabel Yang Diteliti ................................................................................ 30 3.6.1 Variabel Independent ..................................................................... 30 3.6.2 Variabel Dependent........................................................................ 30 3.6.3 Variabel Kendali ............................................................................ 30 3.7 Bahan ......................................................................................................... 30 3.8 Alat............................................................................................................. 31

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

3.9 Pelaksanaan Penelitian .............................................................................. 32 3.9.1 Pemeliharaan Hewan Percobaan .................................................... 32 3.9.2 Persiapan Hewan Percobaan .......................................................... 32 3.9.3 Perlakuan Hewan Percobaan.......................................................... 33 4. Prosedur Pemeriksaan Ureum ..................................................................... 36 5. Prosedur Pemeriksaan Kreatinin .................................................................. 37 6. Analisa Data ................................................................................................. 39 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................................. 41 4.1 Deskripsi Hasil Penelitian .......................................................................... 41 4.2 Berat Badan Mencit.................................................................................... 44 4.3 Kadar Ureum Darah Mencit ...................................................................... 48 4.4 Kadar Kreatinin Darah Mencit .................................................................. 49 4.5 Gambaran Histologis Ginjal Mencit .......................................................... 51 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN.................................................................... 55 5.1 Kesimpulan ................................................................................................ 55 5.2 Saran........................................................................................................... 56 DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................... 57

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

DAFTAR TABEL

No.

Judul

Halaman

1. Gambaran Anatomi Pada Keracunan Plumbum ............................................... 15 2. Data Biologi Mencit (Fox, 1984) ...................................................................... 27 3. Gambaran Hematologi Mencit (Mitruka, 1981;dan Loeb, 1989) ..................... 27 4. Berat Badan Rata-Rata Mencit Kelompok Kontrol dan Perlakuan Yang Diberi Pb Asetat 20 mg/kgBB dan Vitamin C Dosis Berbeda ......................... 45 5. Berat Badan (X± SD) Pada Lima Kelompok Perlakuan .................................. 46 6. Kadar Ureum (X± SD) Pada Lima Kelompok Perlakuan ................................ 48 7. Kadar Kreatinin (X± SD) Pada Lima Kelompok Perlakuan............................ 49

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

DAFTAR GAMBAR

No.

Judul

Halaman

1.

Kerangka Teori ................................................................................................. 7

2.

Kerangka Kerja ................................................................................................. 36

3.

Pemeliharaan Hewan Coba ............................................................................... 40

4.

Penimbangan Berat Badan Hewan Coba .......................................................... 41

5.

Pemberian Vitamin C Secara Oral .................................................................... 41

6.

PemberianPlumbum Asetat Secara Intraperitoneal........................................... 42

7.

Pengambilan Darah Secara Intracardial ............................................................ 43

8.

Pembedahan Laparatomi Untuk Pengambilan Jaringan Gimjal ....................... 44

9.

Kadar Ureum Darah Mencit Pada Kelompok dan Perlakuan ........................... 48

10. Kadar Kreatinin Darah Mencit Pada Kelompok dan Perlakuan ....................... 50 11. Kelompok Kontrol Sel Ginjal ........................................................................... 51 12.A.Kelompok Perlakuan 20 mg Pb Asetat ............................................................ 51 12.B.Kelompok Perlakuan 20 mg Pb Asetat............................................................. 52 13. Kelompok Pemberian Pb 20 mg dan Vitamin C 200 mg.................................. 52 14. Kelompok pemberian Pb 20 mg dan vitamin C 500 mg................................... 53 15. Kelompok pemberian Pb 20 mg dan vitamin C 1000 mg................................. 53

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

DAFTAR LAMPIRAN

No

Judul

Halaman

1. Master Data Kadar Ureum dan Kreatinin ............................................................. 61 2. Hasil Analisa Statistik Dengan SPSS 12............................................................... 62 3. Persetujuan Komite Etik Tentang Pelaksanaan Penelitian Bidang Kesehatan ..... 83 4. Surat Keterangan................................................................................................... 84

xii

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Plumbum (Pb) adalah logam berat yang secara alami terdapat di alam dalam konsentrasi kecil, di dalam air, tanah dan tumbuh-tumbuhan. Intoksikasi plumbum melalui lingkungan sudah di kenal sejak lebih dari 2000 tahun yang lalu. Plumbum berbahaya bagi struktur jaringan tumbuh-tumbuhan, hewan dan manusia. Gejalagejala yang ditimbulkan akibat intoksikasi plumbum pertama sekali ditemukan oleh dokter dari Yunani ( Nikander ). Pada tahun 370 SM Hipocrates menemukan serangan kolik yang berat akibat termakan logam berat plumbum. Bahkan kaisar Romawi meninggal akibat minum anggur yang mengandung plumbum yang tinggi. Dan saat ini polusi plumbum merupakan masalah serius di negara-negara berkembang dan maju. Masyarakat di kota besar dan berdiam di pinggir jalan dengan transportasi kendaraan bermotor yang padat serta di lingkungan industri adalah merupakan kelompok yang rentan terhadap pencemaran timah hitam. Salah satunya adalah terpajannya masyarakat tersebut dengan plumbum melalui pernafasan bersama asap, debu dan gas. ( Ardyanto, 2005 ) Plumbum dan senyawanya masuk ke dalam tubuh manusia melalui saluran pernafasan dan saluran pencernaan, sedangkan absorbsi melalui kulit sangat kecil sehingga dapat diabaikan. Bahaya yang ditimbulkan oleh Pb tergantung oleh ukuran

1 Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

partikelnya. Partikel yang lebih kecil dari 10 µg dapat tertahan di paru-paru, sedangkan partikel yang lebih besar mengendap di saluran nafas bagian atas. Ratarata 10-30 % Pb yang terinhalasi diabsorbsi melalui paru-paru, dan 5 – 10 % dari yang tertelan diabsorbsi melalui saluran cerna (Palar,1994). Selanjutnya plumbum yang diabsorbsi diangkut oleh darah ke organ-organ tubuh sebanyak 95 %. Dan didistribusikan ke jaringan lunak (sum-sum tulang, system saraf, ginjal dan hati ), ke jaringan keras ( tulang, kuku, rambut dan gigi), (Palar, 1994). Plumbum sebagian besar diekskresikan melalui ginjal dan saluran cerna. Ekskresi Pb melalui urin sebanyak 75-80%, melalui feces 15 % dan lainnya melalui empedu, keringat, rambut dan kuku ( Palar,1994). Pada umumnya ekskresi Pb berjalan sangat lambat. Timah hitam mempunyai waktu paruh di dalam darah kurang lebih 25 hari, pada jaringan lunak 40 hari sedangkan pada tulang 25 tahun. Ekskresi yang lambat ini menyebabkan Pb mudah terakumulasi dalam tubuh, baik pada pajanan okupasional maupun non okupasional ( Nordberg,1998). Mekanisme logam berat meracuni tubuh menyebabkan kerusakan oksidatif. Logam berat yang toksik menghasilkan radikal bebas dan menurunkan ketersediaan zat antioksidan tubuh. Patogenesa intoksikasi plumbum adalah multifaktor antara lain dapat mempengaruhi aktivitas enzim, menghambat absorbsi mineral runutan, mengikat protein, merubah homeostatis kalsium, menurunkan ketersediaan zat antioksidan tubuh ( Ercal, 2001 ). Nefrotoksik akibat intoksikasi Pb pertama sekali di temukan oleh Lancereaux 1863. Dia mencatat korteks ginjal mengalami atropy dan fibrosis pada tubulus ginjal

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

seorang seniman yang kerab sekali memasukkan kuas yang digunakan untuk melukis ke dalam mulutnya (Kathuria, 2008). Anak-anak di Australia yang mengalami keracunan Pb juga mengalami nefropati. Tiga jenis nefropati akibat Pb adalah keracunan akut dengan berbagai gejala klasik seperti kolik, enchepalopathy, anemia, neurofati dan fanconi. Yang kedua keracunan kronik terjadi nephritis intertisial progresif dan kerab sekali berhubungan dengan hipertensi dan gout. Ketiga adalah hipertensi. Hasil penelitian, Pinto de Almeida, dkk,1987 pekerja yang terpapar plumbum kadar plumbum darah mengalami peningkatan, dan kreatinin darah juga meningkat. Penelitian yang dilakukan pada wanita di Belgia kadar Pb meningkat sepuluh kali lipat dan terjadi penurunan klirens kreatinin. (Kathuria,2008). Hasil penelitian Hariono (2005) dengan pemberian 0,5 g Pb asetat netral/kg BB/oral/hr pada tikus putih ( Rattus Norvegicus ) selama 16 minggu terjadi penurunan BB yang signifikan ( P<0,05). Begitu juga rata-rata berat absolute hati, ginjal dan limpha terjadi penurunan signifikan dibandingkan kelompok kontrol. Namun, tidak terlihat perbedaan yang signifikan terhadap kadar kreatinin, Blood Urea Nitrogen (BUN) dan enzim alanin aminotransferase (ALT) tikus perlakuan maupun kontrol. Pada penelitian tersebut juga dihasilkan kadar plumbum dalam ginjal lebih tinggi dari hati dan limpa. Hal ini dapat menyebabkan ginjal lebih beresiko daripada jaringan tubuh lain. Selanjutnya hasil pemeriksaan secara makroskopik pada minggu ke 14 dan 16 organ hati dan ginjal tampak pucat sedangkan organ lain normal. Secara mikroskopik

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

pada minggu ke 12-16 epitel tubulus konvulatus proksimal ginjal terlihat degenerasi, hyperplasia, kariomegali dan pada minggu ke 8 terlihat benda-benda inklusi dalam inti sel. Terlihat pula vakuolisasi duktus kolektivus, dilatasi lumen disertai akumulasi sel debris dan pelebaran ruangan Bowman. Sedangkan penelitian yang dilakukan Anggraini (2008) menunjukkan kerusakan ginjal terlihat pada minggu ke 8 dengan pemberian Pb asetat 100 mg/kg BB/oral/hr. Aktivitas senyawa Pb dalam tubuh seringkali dikaitkan dengan stress oksidatif,

melalui

pembentukan

molekul

Reactive

Oxygen

species

(ROS)

(Aykin,2003). Toksisitas Pb dalam pembentukan radikal bebas adalah melalui dua cara berbeda berhubungan yaitu dengan pembentukan ROS dan penekanan langsung cadangan antioksidan tubuh ( Ercal, 2001). Antioksidan merupakan senyawa-senyawa yang dapat meredam dampak negatif sutau oksidan, termasuk di dalamnya enzim-enzim dan protein-protein pengikat logam. Kemampuan menetralisir senyawa oksidan sebenarnya sudah dimiliki oleh tubuh/sel itu sendiri namun tidak cukup untuk menetralisir senyawa oksidan yang diakibatkan oleh paparan bahan-bahan beracun yang berasal dari lingkungan yang bersifat radikal, termasuk salah satunya timbal dari pembakaran mesin mobil, pestisida, nitrat,radioaktif,merkuri, dan lain sebagainya. Vitamin C (L-ascorbic acid) merupakan senyawa alami yang bersifat antioksidan kuat dan pengikat radikal bebas namun bukan bersifat enzimatik. Dari

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

segi fungsinya vitamin C dapat mencegah terjadinya reaksi berantai terutama yang disebabkan radikal bebas yang paling berbahaya. Vitamin C adalah vitamin larut air yang dibutuhkan untuk fungsi metabolik tubuh dan mencegah oksidatif stres pada jaringan tubuh. Selain itu vitamin C dapat menghambat ambilan Pb dan menurunkan sitotoksisitas Pb. Dan terbukti efektif mengurangi nephrotoksik dan dapat sebagai pelindung ginjal (Kathuria,2008). Pada tikus yang diberi vitamin C minimal 500 mg/L pada air minumnya mampu menurunkan kadar ROS 40% (Hsu,1998). Penelitian tentang efek toksik Pb pada produksi hem dapat diperbaiki dengan pemberian vitamin C 100 mg/kg BB (Vij AG,1998). Penelitian yang dilakukan pada ibu hamil dengan memberi vitamin C 1000 mg/hari dapat menurunkan kadar Pb darah 1,1-5,1 µg/dL selama kehamilan (West WL,1994). Efek vitamin C dapat menurunkan kadar Pb darah adalah dikarenakan vitamin C menurunkan absorbsi Pb di usus halus. Pekerja yang terpapar Pb dengan diberi 1000 mg vitamin C/hari selama 30 hari kadar Pb darah turun 0,4-1,8 µg/dL mulai minggu pertama sampai penelitian berakhir (Dawson EB,1999). Berdasarkan uraian diatas, dapat diketahui bahwa plumbum sangat berbahaya bagi kesehatan dan bahkan dapat merusak organ tubuh termasuk ginjal dan yang paling cepat menerima efek toksik logam berat tersebut. Sebagai parameter gangguan fungsi ginjal dilihat dari hasil pemeriksaan kadar ureum, kreatinin dan histopatologis ginjal. Dan diharapkan dengan pemberian vitamin C dapat bermanfaat untuk

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

mencegah atau mengurangi kerusakan tersebut. Oleh karena itu penelitian ini melihat bagaimana pengaruh proteksi vitamin C terhadap kadar ureum kreatinin dan gambaran histopatologis ginjal mencit jantan ( Mus musculus L ) yang dipapar plumbum.

1.2 . Perumusan Masalah Berdasarkan latar belakang di atas, maka masalah dapat di rumuskan sebagai berikut: “Apakah ada pengaruh proteksi vitamin C terhadap fungsi ginjal mencit (Mus musculus L ) yang dipapar Pb ? “

1.3. Kerangka Teori Polutan Pb di udara secara kronis akan masuk ke tubuh melalui inhalasi, kontak kulit dan mukosa yang kemudian berakumulasi dalam darah. Pemaparan kronis ini akan memberi gejala yang sama dengan senyawa Pb yang termakan/terminum ( masuk melalui saluran cerna). Toksisitas yang ditimbulkan Pb akan menyebabkan kerusakan jaringan dari tingkat yang ringan ( perubahan proses biokimia normal) sampai pada kematian sel. Perubahan proses biokimia akan terlebih dulu terjadi di darah, sebagai jaringan yang terlebih dahulu terpapar. Sebagai proteksi diberi vitamin C dengan dosis yang berbeda pada waktu yang sama. Dalam hal untuk melihat adanya gangguan fungsi ginjal dilakukan pemeriksaan kadar ureum,kreatinin dan gambaran histopatologis jaringan ginjal. Selanjutnya dianalisa kadar vitamin C yang paling berperan mengatasi fungsi ginjal mencit yang dipapar plumbum.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

PLUMBUM FAKTOR YANG BERPENGARUH: UMUR, MAKANAN, LINGKUNGAN

VITAMIN C

STRES OKSIDATIF

UREUM / KREATININ

GINJAL HISTOPATOLOGIS GINJAL

Gambar 1. Kerangka Teori 1.4.Tujuan penelitian Tujuan Umum Untuk mengetahui pengaruh proteksi vitamin C secara oral terhadap kadar ureum, kreatinin dan gambaran histopatologis ginjal mencit ( Mus musculus L ) yang dipapar plumbum. Tujuan khusus 1. Untuk mengetahui kadar ureum, kreatinin darah mencit yang dipapar plumbum. 2. Untuk mengetahui kadar ureum,

kreatinin darah mencit yang dipapar

plumbum dengan proteksi vitamin C pada berbagai dosis.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

3.

Untuk mengidentifikasi gambaran histopatologis ginjal mencit yang dipapar plumbum dengan proteksi vitamin C pada berbagai dosis.

4.

Untuk menentukan kadar vitamin C yang paling berpengaruh terhadap fungsi ginjal mencit yang dipapar plumbum

1.5. Hipotesis Pemberian vitamin C dapat mempengaruhi fungsi ginjal mencit yang dipapar plumbum 1.6. Manfaat Penelitian 1.

Memberikan informasi kepada masyarakat tentang toksisitas plumbum terhadap fungsi ginjal.

2. Memberikan informasi bahwa vitamin C sebagai salah satu antioksidan yang diperlukan tubuh untuk menetralisir senyawa-senyawa radikal

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 PLUMBUM (Pb) 2.1.1 Gambaran Umum Plumbum merupakan salah satu unsur logam berat yang konsistensinya lunak dan berwarna kelabu kebiruan. Timbal dapat berasal secara alami seperti dari bebatuan, air telaga dan air sungai, udara dan tumbuh-tumbuhan. Selain itu timbal juga dapat bersumber dari industri yang memakai Pb sebagai bahan baku maupun bahan penolong pada industri pengecoran maupun pemurnian, industri baterai, industri bahan bakar, industri kabel, industri cat dan industri kimia yang menggunakan bahan pewarna. ( Palar, 1994). a. Sumber dari alam Kadar Pb yang terdapat secara alami pada bebatuan sekitar 13mg/kg. Khusus Pb yang tercampur dengan batu fosfat dan terdapat di alam batu pasir ( sand stone ) kadarnya lebih besar yaitu 100 mg/kg. Pb yang terdapat di tanah sekitar5-25 mg/kg dan air di bawah tanah ( ground water ) berkisar antara 1-60 µg/liter. Kandungan Pb yang terdapat di air permukaan seperti air telaga dan air sungai adalah 1-10 µg/liter. Sedangkan kandungan Pb di udara secara alami adalah 0,00010,001 µg/m3. Hasil penelitian yang dilakukan di USA pada sayuran dan padi-padian terdapat 0,1-1,0 µg/kg berat kering.

9 Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Logam berat Pb yang berasal dari tambang dapat berubah menjadi PbS (golena), PbCO3 (cerusite) dan PbSO4 (anglesite) dan ternyata golena merupakan sumber utama Pb yang berasal dari tambang. ( WHO, 1992) b. Sumber dari Industri Sumber pencemaran Pb dari industri berasal dari semua industri yang menggunakan Pb sebagai bahan baku atau penolong seperti : 1. Industri pengecoran maupun pemurnian Menghasilkan timbal konsentrat ( primary lead ) maupun secondary lead yang berasal dari potongan logam ( scrap ) 2. Industri baterai Menggunakan logam pb terutama lead antimony alloy dan lead oxides sebagai bahan dasarnya 3. Industri bahan bakar Pb berupa tetra ethyl lead dan tetra methyl lead yang banyak di pakai sebagai anti knock pada bahan bakar, sehingga baik industri maupun bahan baku yang dihasilkan merupakan sumber pencemaran Pb 4. Industri kabel Industri kabel memerlukan Pb untuk melapisi kabel. Saat ini pemakaian Pb di industri kabel mulai berkurang, walaupun masih digunakan campuran logam Cd, fe, Cr, Au dan arsenic yang juga berbahaya untuk kehidupan makhluk hidup 5. Industri kimia yang menggunakan bahan pewarna

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Pada industri kimia Pb sering sekali digunakan karena toksisitasnya lebih rendah dari logam pigmen yang lain. Sebagai pewarna merah pada cat biasanya di pakai red lead, sedangkan untuk warna kuning di pakai lead chromate. 6. Sumber dari transportasi Pb yang di gunakan sebagai bahan tambahan pada bahan bakar kendaraan bermotor menghasilkan emisi inorganik. Selanjutnya ia akan bercampur dengan oli dan melalui proses di alam bensin akan keluar dari knalpot bersama dengan gas buang lainnya (Mukono, 2002 ). Menurut WHO pajanan timbal yang diperkenankan untuk pekerja laki-laki 40 µg/dL dan untuk pekerja perempuan adalah 30 µg/dL ( de Roos,1997 dan OSHA, 2005). 2.1.2 Metabolisme Pb a. Absorbsi Absorbsi Pb terjadi melalui saluran pernafasan, saluran pencernaan, dan sedikit melalui kulit. Absorbsi Pb melalui saluran pernafasan di pengaruhi oleh tiga proses yaitu deposisi, pembersihan mukosiliar, dan pembersihan alveolar. Deposisi terjadi di nasofaring, saluran trakeabronkhial, dan alveolus. Deposisi tergantung pada ukuran partikel Pb, volume pernafasan dan daya larut. Partikel yang lebih besar di deposit lebih banyak di saluran pernafasan bagian atas di banding partikel yang lebih klecil. (De Roos, 1997, dan OSHA, 2005).

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Sedangkan absorbsi plumbum melalui saluran cerna tergantung pada ukuran partikel logam berat tersebut, waktu transit gastrointestinal, status gizi dan usia. (Kathuria,2008) Absorbsi plumbum anorganik melalui saluran pencernaan pada hewan percobaan dan manusia berkisar 10% ( Kehoe,1965;Rabinowitz et al.,1973). Alexander et al.,(1973) melaporkan bahwa tingkat absorbsi yang tinggi (sekitar 53 %) pada anak-anak berumur 5 bulan sampai 8,5 tahun. Hal ini mendukung penelitian bahwa absorbsi plumbum menurun dengan meningkatnya usia dan berat badan (Kostial et al.,1971;Forbes dan Reina,1972;Conrad dan Barton,(1978). Plumbum organik seperti tetraethyl lead (TEL) yang di pakai sebagai bahan additive pada bahan bakar bensin dan tetramethyl lead (TML) hampir seluruhnya di absorbsi melalui kulit dan traktus gastrointestinal karena mempunyai kemampuan mudah larut dalam substansi lemak (Bartik, 1981). Demikian juga TEL mudah di absorbsi melalui kulit ( Lang dan Kunze, 1948 ) dan melalui epithel paru (Mortensen, 1942). Dalam tubuh TEL, akan di ubah menjadi triethyl lead dan diakumulasikan pada jaringan yang kaya lemak seperti hati, ginjal dan otak (Bolanowska et al.,1967) Pembersihan mukosiliar membawa partikel di saluran pernafasan bagian atas ke nasofaring kemudian di telan. Rata-rata 10-30% dari yang tertelan di absorbsi melalui saluran cerna (Palar, 1994 ). b. Distribusi dan Penyimpanan Timah hitam yang di absorbsi di angkut oleh darah ke organ-organ tubuh sebanyak 95%. Pb dalam darah di ikat oleh eritrosit. Sebagian Pb plasma dalam

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

bentuk yang dapat berdifusi dan diperkirakan dalam keseimbangan pool Pb tubuh lainnya. Yang di bagi menjadi dua yaitu ke jaringan lunak (sum-sum tulang, system syaraf , ginjal, hati ) dan jaringan keras (tulang,kuku,rambut,gigi) (Palar,1994). Gigi dan tulang panjang mengandung Pb yang lebih banyak di bandingkan tulang lainnya. Pada gusi dapat terlihat lead line yaitu pigmen berwarna abu-abu pada perbatasan antara gigi dan gusi.(Goldstein & Kipen,1994). Hal itu merupakan ciri khas keracunan Pb. Pada jaringan lunak sebagian Pb di simpan dalam aorta,hati,ginjal,otak dan kulit. Timah yang ada di jaringan lunak bersifat toksik. c. Ekskresi Ekskresi Pb melalui beberapa cara yang terpenting adalah melalui ginjal dan saluran cerna. Ekskresi Pb melalui urin sebanyak 75-80%, melalui feces 15% dan lainnya melalui empedu, keringat,rambut dan kuku ( Palar, 1994 ). Ekskresi Pb melalui saluran cerna di pengaruhi oleh saluran aktif dan pasif kelenjar saliva,pancreas, dan saluran lainnya di dinding usus,regenerasi sel epitel dan ekskresi empedu. Sedangkan ekskresi Pb melalui ginjal adalah melalui filtrasi glomerulus. Kadar Pb dalam urin merupakan cerminan pajanan baru sehingga pemeriksaan Pb urin di pakai untuk pajanan okupasional (Goldstein & Kippen,1994). Pada umumnya ekskresi Pb berjalan sangat lambat. Timah hitam waktu paruh di dalam darah kurang lebih 25 hari, pada jaringan lunak 40 hari sedangkan pada tulang 25 tahun. Ekskresi yang lambat ini menyebabkan Pb mudah terakumulasi dalam tubuh, pada pajanan okupasional (Nordberg, 1998). Ukuran keracunan suatu zat ditentukan oleh kadar dan lamanya pemaparan.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

2.1.3 Toksisitas Pb Saluran pencernaan, susunan saraf, system hemopoietik dan ginjal merupakan alat-alat tubuh yang paling sensitive terhadap efek toksik Pb. Logam berat Pb dapat meracuni tubuh manusia baik secara akut maupun kronis. Senyawa Pb organik mempunyai daya racun yang lebih kuat dibandingkan dengan senyawa Pb anorganik. a. Intoksikasi Pb Akut Intoksikasi Pb akut jarang terjadi, biasanya bersifat accidental poisoning yaitu termakannya senyawa Pb akut yang mengenai saluran pencernaan dengan gejala haus, nausea, vomitus, diare, konstipasi, sakit perut dan rasa logam ( metallic taste ). Sedangkan gejala yang berhubungan dengan susunan saraf pusat berupa insomnia, tremor, halusinasi dan gejala pada anak yang menonjol yaitu ataxia, konvulsi, koma dan ensefalopati. Gejala intoksikasi Pb terhadap susunan saraf perifer dapat berupa parastesi perasaan, sakit dan lemah pada otot terutama pada kaki. Anak-anak dan dewasa dengan keracunan Pb akut dapat menderita disfungsi tubuli proximal dengan gejala-gejala seperti sindroma de Toni fanconi (aminosiduria, glikosuria dan hiperfosfaturia). Hal ini dapat disebabkan oleh gangguan enzim tubuli atau defek mitokondria yang dapat kembali normal sesudah di obati dengan chelating agent.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

b. Intoksikasi Pb kronik Intoksikasi Pb kronik di dapatkan melalui exposed terhadap Pb secara terus menerus sehingga akumulasi Pb makin meningkat dalam jaringan, yang suatu saat melampaui safety level dan menimbulkan keluhan dan gejala intoksikasi. Perubahan anatomik terutama akibat keracunan Pb dapat terlihat pada tabel berikut ( Robinson & Kumar,1995 )

No. 1.

2.

3. 4. 5.

Tabel 1. Gambaran Anatomi Pada Keracunan Plumbum Target Kelainan Darah • Anemia biasanya mikrositik, hipokromik(berhubungan dengan rusaknya sintesa hemoglobin dan meningkatnya kerapuhan sel-sel darah merah ) • Basophilic stippling pada sel-sel darah merah(berhubungan dengan mitokondria dan lukaluka ribosom dengan penyatuan ribosom) Sistem saraf • Ensefalopati ( pada anak-anak) dengan membengkaknya otak, kemungkinan dieliminasi otak dan otak kecil yang putih sebelah belakang, kematian pad sel-sel saraf, cabang-cabang halusnya dan perkembangbiakan astrositik • Inflamasi saraf dengan demielinasi Rongga Mulut • Garis plumbum ginggiva terdapat pada orang dewasa dengan gingivitis ( deposit berwarna biru/hitam dari plumbum sulfide ) Ginjal • Inklusi intranuklear tahan asam, terutama dalam selsel tubulus proksimal ( terdiri dari bagian kompleks plumbum-protein) Sistem rangka • Endapan plumbum yang radiopak pada epifise anakanak Hasil penelitian Osamah (2006), kerusakan ginjal dapat terjadi apabila

terpapar Pb 40 µg/dL, kerusakan saraf dan anemia apabila Pb darah > 60µg/dL. Kadar Pb dalam darah > 150 µg/dL dapat menyebabkan ensefalopati, sakit kepala,

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

konstipasi, sakit perut, diare dan anoreksia. Konvulsi dan paralisa dapat juga terjadi bahkan bisa mengakibatkan kematian. Menurut Jones, dkk.,(1997) toksisitas Pb terhadap hewan dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor antara lain : 1. Umur ; lebih peka pada usia muda 2.

Spesies ; adanya variasi individu dalam kepekaan dan jumlah plumbum yang di ekskresikan

3.

Keadaan reproduksi

4.

Kadar plumbum yang masuk ke dalam tubuh; pada kasus keracunan akut, kadar plumbum yang masuk cukup besar dapat menimbulkan kematian mendadak Sedangkan pada kasus kronis masuknya plumbum dengan kadar rendah dan secara terus menerus dalam jangka waktu lama tidak menimbulkan kematian mendadak, walau jumlah total plumbum yang masuk lebih besar dibandingkan pada kasus keracunan yang akut

5. Bentuk plumbum; bentuk padat atau PbO2 yang tidak larut dalam air, kurang toksik di banding Pb asetat yang dapat larut dalam air 6. Jumlah dan kecepatan absorbsi; hanya 1-2 % dari plumbum yang masuk dapat diabsorbsi melalui pencernaan sedangkan melalui inhalasi relatif besar. Plumbum organik seperti TEL dan TML diabsorbsi lebih cepat melalui kulit 7. Hadirnya beberapa racun dan penyakit lain dapat mempertinggi toksisitas

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

8. Pengaruh hormonal; plumbum yang berada di dalam tulang di pengaruhi oleh hormon yang bekerja pada metabolisme kalsium tulang. 2.1.4 Efek Plumbum pada Ginjal Mekanisme toksisitas Pb asetat masih kontroversi, diduga plumbum berikatan secara kovalen dengan preparat besi (III) pada asam nukleat dan protein, menghambat penggabungan besi menjadi hem, mengganggu sintesa globin, menghambat asam delta aminolevulenat dehidratase dalam sel adarh merah serta mempengaruhi sintesa DNA in vitro ( Robin dan Kumar, 1995). Toksisitas Pb menimbulkan pembentukan radikal bebas dengan melalui dua cara yaitu : 1. pembentukan reactive oxygen species (ROS) seperti hydroperoksida, singlet oxygen dan hydrogen peroksida 2. secara langsung menurunkan ketersediaan antioksidan tubuh. Patogenesa toksisitas plumbum asetat merupakan multifaktor yaitu plumbum secara langsung mempengaruhi aktifitas enzim, menghambat absorbsi mineral runutan, mengikat sintesa struktur protein, merubah homeostatis kalsium dan menurunkan zat antioksidan tubuh Beberapa penelitian mengenai efek Pb terhadap ginjal antara lain penelitian Valverde (2002) pemberian Pb asetat 0,0068 μg/cc inhalasi pada mencit menunjukkan peningkatan migrasi DNA pada ginjal setelah pemaparan. Hasil penelitian Hariono (2005) dengan pemberian 0,5 g Pb asetat netral/kg BB/oral/hr pada tikus putih

( Rattus Norvegicus )

selama 16 minggu terjadi

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

penurunan BB yang signifikan ( P<0,05). Begitu juga rata-rata berat absolute hati, ginjal dan limpha terjadi penurunan signifikan dibandingkan kelompok kontrol. Namun, tidak terlihat perbedaan yang signifikan terhadap kadar kreatinin, Blood Urea Nitrogen (BUN) dan enzim alanin aminotransferase (ALT) tikus perlakuan maupun kontrol. Pada penelitian tersebut juga dihasilkan kadar plumbum dalam ginjal lebih tinggi dari hati dan limpa. Hal ini dapat menyebabkan ginjal lebih beresiko daripada jaringan tubuh lain. Selanjutnya hasil pemeriksaan secara makroskopik pada minggu ke 14 dan 16 organ hati dan ginjal tampak pucat sedangkan organ lain normal. Secara mikroskopik pada minggu ke 12-16 epitel tubulus konvulatus proksimal ginjal terlihat degenerasi, hyperplasia, kariomegali dan pada minggu ke 8 terlihat benda-benda inklusi dalam inti sel. Terlihat pula vakuolisasi duktus kolektivus, dilatasi lumen disertai akumulasi sel debris dan pelebaran ruangan Bowman. Implikasi klinik akibat paparan plumbum pada ginjal menyebabkan tidak berfungsinya tubulus renal, nefropati irreversibel, sklerosis vaskuler , sel tubulus atrofi,

fibrosis

dan

sklerosis

glomerulus.

Akibatnya

dapat

menimbulkan

aminoaciduria dan glukosuria, dan jika paparannya terus berlanjut dapat terjadi nefritis kronis (Mukono J, 2006) 2.1.5 Radikal Bebas dan Antioksidan Suatu radikal bebas dapat dinyatakan sebagai spesies yang terdiri dari satu atau lebih electron yang tidak berpasangan. Radikal bebas ini dapat bereaksi dengan berbagai cara. Salah satunya adalah apabila dua radikal bebas bertemu maka elektron

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

yang tidak berpasangan tadi akan bergabung membentuk ikatan kovalen ( Halliwell, 1994 ). Radikal bebas di anggap berbahaya karena menjadi sangat reaktif dalam upaya mendapatkan pasangan elektronnya, sehingga dapat bereaksi dengan berbagai biomolekul penting seperti enzim, DNA dan juga merusak sel lainnya yang akhirnya dapat menimbulkan berbagai penyakit. Radikal bebas yang berbahaya bagi kesehatan dapat di hambat dengan penggunaan antioksidan ( Ivanova, et.,2000). Ketidakseimbangan antara radikal bebas dengan antioksidan menghasilkan stress oksidatif. Stres oksidatif merupakan pemicu patogenesa keracunan Pb. Stres oksidatif adalah suatu keadaan dimana tingkat kelompok oksigen reaktif (ROS) yang toksik melebihi pertahanan antioksidan endogen. Keadaan ini mengakibatkan kelebihan radikal bebas yang akan bereaksi dengan lemak,protein dan asam nukleat seluler sehingga terjadi terjadi kerusakan lokal dan disfungsi organ tertentu ( Arief, 2006 ) seperti hati, ginjal dan jaringan otak. ROS yang terbentuk akibat paparan Pb asetat dapat diidentifikasi di paru-paru, jaringan endotel, testis, sperma, hati , otak dan ginjal. Antioksidan adalah senyawa pemberi electron yang dapat menetralkan radikal bebas, atau suatu bahan yang berfungsi mencegah system biologi tubuh dari efek yang merugikan yang timbul dari proses ataupun reaksi yang menyebabkan oksidasi yang berlebihan.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Packer ( 1995 ), mengatakan bahwa sebagai bahan penetral dari radikal bebas, maka antioksidan yang di kenal ada yang berupa enzim dan ada yang berupa mikronutrien. Enzim antioksidan dibentuk dalam tubuh, yaitu superoxide dismutase (SOD), glutation peroksidase, katalase, dan glutation reduktase. Sedangkan antioksidan yang berupa mikronutrien adalah vitamin A, C dan E (Shahidi, 1997). Vitamin A/b-caroten merupakan scavengers (pemulung) oksigen tunggal, vitamin C pemulung superoksid dan radikal bebas lain. Vitamin C berdasarkan fungsinya merupakan tipe pereduksi yaitu mentrasfer atom H atau oksigen. Sedangkan vitamin E pemutus rantai peroksida lemak ( Krisnamurthy (1983),Watson dan Leonard,(1986);Packer(1995). Vitamin C bekerja sebagai suatu koenzim dan pada keadaan tertentu merupakan reduktor dan antioksidan. Absorpsi vitamin C dari usus berlangsung secara cepat dan sempurna (90%), tapi menurun pada dosis di atas 1 gram. Distribusinya ke seluruh jaringan baik. Persediaan tubuh untuk sebagian besar terdapat dalam korteks anak ginjal. Dalam darah sangat mudah dioksidasi secara reversible menjadi dehidroascorbat yang hampir sama aktifnya. Sebagian kecil di rombak menjadi asam oksalat dengan jalan pemecahan ikatan antara C2 dan C3. Ekskresi berlangsung terutama sebagai metabolit dehidronya dan sedikit sebagai asam folat (Tjay,2002) Mekanisme kerja berbagai aktifitas asam askorbat masih belum jelas. Dalam beberapa proses asam askorbat tidak terlibat secara langsung, tapi di perlukan untuk mempertahankan agar kofaktor logam dapat berada dalam keadaan tereduksi. Salah

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

satu fungsi dari asam askorbat adalah sebagai antioksidan umum yang larut dalam air, dan bekerja pada sitosol dan cairan ekstraseluler. ( Murray et al.,2003) Dari berbagai penelitian menunjukkan bahwa pemberian vitamin C dengan dosis tinggi dapat menanggulangi beberapa proses penyakit. Dengan pemberian vitamin C 500 mg bahkan 1000 mg dapat mengatasi infeksi virus. Dan dosis 200-500 mg juga dapat mengatasi kerusakan jaringan akibat berbagai logam berat ( Klenner, 1997). Penelitian Dawson, dkk menunjukkan vitamin C 1000 mg secara signifikan dapat menurunkan kadar Pb darah pada perokok. Adapun dosis optimal vitamin C sebagai antioksidan sangat tergantung derajat paparan radikal bebas ( Sanjoto,2001 ) 2.2. Ginjal 2.2.1. Anatomi Umum Ginjal adalah suatu kelenjar yang terletak pada dinding posterior abdomen, di daerah lumbal, di sebelah kanan dan kiri tulang belakang, di bungkus lapisan lemak yang tebal, di belakang pertonium. Ginjal jumlahnya ada dua buah kiri dan kanan, ginjal kanan lebih tebal dari yang kiri.Masing-masing ginjal memiliki facies anterior dan posterior, margo medialis dan lateralis, ekstremitas posterior dan inferior. Kedua ginjal bersama-sama mengandung kira-kira 2.400.000 nefron dan tiap nefron dapat membentuk urin sendiri. Pada dasarnya nnefron terdiri dari : a. Suatu glomerulus dari mana cairan difiltrasikan b. Suatu tubulus panjang di mana cairan yang difiltrasikan di ubah menjadi urin dalam perjalannnya ke pelvis ginjal Dari segi anatomis ginjal laki-laki lebih panjang dari ginjal perempuan

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Fungsi Ginjal 1. Memegang peranan penting dalam pengeluaran zat-zat toksik atau racun 2. Mempertahankan suasana keseimbangan cairan tubuh 3. Mempertahankan keseimbangan kadar asam dan basa cairan tubuh 4. Mempertahankan keseimbanagan garam-garam dan zat-zat lain dalam tubuh seperti ion natrium, ion kalium, ion klorida dan ion hydrogen yang cenderung terkumpul di dalam tubuh dalam jumlah berlebihan. 5. Mengeluarkan sisa-sisa metabolisme hasil akhir dari protein ureum, kreatinin, amoniak, asam urat dan garam-garam asam urat. 6. Mengatur aktifitas metabolik: hormone, glukoneogenesis. Ginjal di perdarahi oleh arteri renalis, sedangkan glandula suprerenalis di darahi oleh arteri supra renalis.

2.2.2 Gambaran Histologi Setiap ginjal terdiri atas 1-4 juta nefron. Setiap nefron terdiri atas bagian yang melebar, korpuskulus renal; tubulus kontorus proksimal; segmen tipis dan tebal ansa Henle; dan tubulus kontortus distal. Tubulus dan duktus koligens, menampung urin yang di hasilkan oleh nefron dan menghantarnya ke pelvis renalis. Nefron dan duktus koligens merupakan tubulus urniferus sebagai satuan fungsional ginjal. Setiap korpuskulus renal berdiameter 200µm dan terdiri atas seberkas kapiler yaitu glomerulus, dikelilingi oleh kapsula epitel berdinding ganda yang di sebut kapsula Bowman. Lapisan luar membentuk batas luar korpuskulus renal di sebut

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

lamina parietalis yang terdiri atas epitel selapis gepeng yang di tunjang lamina basalis dan selapis tipis serat retikulin. Lapisan dalam ( lamina visceralis ) meliputi kapiler glomerulus yang terdiri dari sel-sel podosit. Pada katub urinarius dari korpuskulus renal, epitel gepeng dari lapisan parietal kapsula Bowman, berhubungan langsung dengan epitel silindris dari tubulus kontortus proksimal. Tubulus ini lebih panjang dari kontortus distal dan karenanya tampak lebih banyak dekat korpuskulus renalis dalam labirin korteks. Tubulus ini memiliki lumen lebar dan di kelilingi oleh kapiler peritubuler. Lengkung Henle adalah struktur berbentuk U terdiri atas ruas tebal descenden dengan struktur yang sangat mirip tubulus kontortus proksimal, ruas tipis descenden; ruas tipis ascenden; dan ruas tebal ascenden, yang strukturnya sangat mirip dengan tubulus kontortus distal. Lebih kurang sepertujuh dari semua nefron terletak dekat batas korteks –medula yang di sebut nefron jukstamedula. Nefron lainnya di sebut nefron kortikal. Semua nefron turut serta dalam proses filtrasi, absorpsi dan sekresi. Bila ruas ascenden lengkung Henle menerobos korteks, struktur histologisnya tetap terpelihara tetapi menjadi berkelok-kelok dan di sebut tubulus kontortus distal, yaitu bagian terakhir nefron yang di lapisi oleh epitel selapis kuboid. Lumen tubulus distal lebih besar karena sel-sel tubulus distal lebih gepeng dan lebih kecil dari tubulus proksimal, maka tampak lebih banyak sel dan inti pada dinding tubulus distal. Urin mengalir dari tubulus kontortus distal ke tubulus koligens, yang saling bergabung dan membentuk duktus koligens yang lebih besar dan lebih lurus yaitu duktus papilaris Bellini yang berangsur-angsur melebar sewaktu mendekati puncak

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

pyramid. Tubulus koligens yang lebih kecil di lapisi oleh epitel kuboid dan berdiameter kurang lebih 40 µm. Dalam medulla, duktus koligens merupakan komponen utama dari mekanisme pemekatan urin (Junquiera, 1995 ). 2.3 Pemeriksaan Biokimia Ginjal Beberapa uji pemeriksaan ginjal yang sering di lakukan, meliputi pemeriksaan kadar

albumin,

pre

albumin,

Blood

Urea

Nitrogen

(BUN),

kreatinin,

magnesium,nitrogen,fosfor, kalium, & serum bikarbonat (Hartono, A 2000). Sedangkan untuk menguji fungsi ginjal secara sederhana sering di lakukan: 1. Test untuk protein (albumin) Bila ada kerusakan pada glomerulus atau tubulus maka protein dapat bocor masuk ke urine 2. Mengukur konsentrasi urea darah Bila ginjal tidak mampu mengeluarkan ureum, maka ureum darah naik di atas kadar normal 3. Test Konsentrasi Pada pemeriksaan ini tidak di perkenankan makan atau minum selama 12 jam untuk melihat sampai berapa tinggi kenaikan berat jenis. 2.3.1 Ureum Ureum adalah hasil akhir metabolisme protein, berasal dari asam amino yang telah di pindah amonianya di dalam hati dan mencapai ginjal. Ureum bersifat racun di dalam tubuh, pengeluarannya dari tubuh melalui ginjal berupa air seni ( urine ). Diekskresikan rata-rata 30 gram sehari.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Kadar ureum normal dalam darah adalah 30 mg/100 ml darah, tetapi hal ini tergantung dari jumlah normal protein yang di makan dan fungsi hati dalam pembentukan ureum. Bila ginjal rusak atau kurang baik fungsinya maka kadar ureum darah dapat meningkat dan meracuni sel-sel tubuh, keadaan tersebut disebut uremia. Rata-rata tubuh membentuk 25-30 gram ureum tiap hari ( lebih banyak pada orang-orang dengan diet tinggi protein dan lebih kecil pada orang-orang diet rendah protein ). Semua ureum ini harus di ekskresikan ke dalam urine, kalau tidak maka akan terkumpul di dalam cairan tubuh. Konsentrasi normal di dalam plasma kira-kira 26 mg/100 ml, tetapi dalam keadaan abnormal, kadang-kadang dapat mencapai 800 mg/ 100 ml (penderita gagal ginjal ). Ekskresi ureum ditentukan oleh 2 faktor utama, yaitu : 1. Konsentrasi ureum dalam plasma 2. Laju filtrasi glomerulus Umumnya jumlah ureum yang keluar melalui tubulus ke dalam urine kira-kira sesuai dengan muatan ureum yang memasuki tubulus proksimal, rata-rata 50-60 %. 2.3.2 Kreatinin ( serum & urine ) Kreatinin adalah suatu zat sisa metabolisme yang terbentuk dari hasil pemecahan kreatin dalam rangkaian proses perubahan makanan menjadi energi. Jumlah produksi kreatinin sesuai dengan masssa otot. Kreatinin dikeluarkan dalam tubuh melalui ginjal. Oleh karena itu jika kadar kreatinin meningkat di dalam darah dapat menjadi indikasi dari berkurangnya fungsi

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

ginjal. Jika 50 % atau lebih nefron rusak kadar kreatinin menjadi meningkat. Kreatinin serum secara khusus berguna dalam mengevaluasi fungsi glomerulus. Kreatinin serum di nilai lebih sensitive dan merupakan indikator penyakit ginjal yang lebih spesifik dari pada BUN. Kreatinin serum ini kemudian meningkat dan tidak di pengaruhi oleh diet atau masukan cairan. Rasio normal BUN/kreatinin adalah 10 : 1. Nilai rasio yang lebih tinggi dari normal menunjukkan adanya gangguan pre renal. Kadar normal serum kreatinin pada orang dewasa adalah 0,5-1,5 mg/dl; 45132,5 µmol/L (unit SI ). Pada wanita kadarnya sedikit lebih rendah akibat massa otot yang kurang. (Le Fever Kee,1997).

2.4 Biologi Mencit Mencit termasuk dalam genus Mus, subfamily Murinae, family Muridae, order Rodentia. Mencit yang sudah di pelihara di laboratorium sebenarnya masih satu famili dengan mencit liar. Sedangkan mencit yang paling sering di pakai untuk penelitian biomedis adalah Mus musculus. Berbeda dengan hewan-hewan lainnya, mencit tidak memiliki kelenjar keringat. Pada umur empat minggu berat badannya mencapai 18-20 gram. Jantung terdiri dari empat ruang dengan dinding atrium yang tipis dan dinding ventrikel yang lebih tebal. Peningkatan temperatur tubuh tidak mempengaruhi tekanan darah, sedangkan frekuensi jantung, cardiac output berkaitan dengan ukuran tubuhnya. Hewan ini memiliki karakter lebih aktif pada malam hari dibandingkan siang hari.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Di antara spesies-spesies hewan lainnya, mencitlah yang paling banyak digunakan untuk tujuan penelitian medis ( 60-80 % ) karena murah dan mudah berkembang biak. Tabel 2. Data biologi mencit ( Fox, 1984 ) Berat badan Jantan (gram)

: 20 - 40

Betina (gram )

: 18 - 35

Lama hidup ( tahun )

: 1–3

Temperatur tubuh (oC)

: 36,5

Kebutuhan air

: ad libitum

Kebutuhan makanan (g/hari)

:4–5

Tabel 3. Gambaran Hematologi Mencit ( Mitruka, 1981; dan Loeb,1989) Eritosit ( RBC) (x 10 6/mm3)

: 6,86 – 11,7

BUN ( mg/dl)

: 13,9 – 28,3

Kreatinin ( mg/dl )

: 0,30 – 1,00

Bilirubin ( mg/dl)

: 0,10 – 0,90

Kolesterol (mg/dl)

: 26,0 – 82,4

Total protein (g/dl)

:4,00 – 8,62

Albumin (g/dl)

: 2,52 – 4,84

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

BAB III METODOLOGI PENELITIAN 3.1 Desain Penelitian Desain penelitian yang digunakan pada penelitian ini adalah studi experimental dengan desain Rancangan Acak Lengkap (RAL). Sebanyak 30 ekor mencit jantan (Mus musculus L) strain Double Distsch Webster (DDW) di bagi ke dalam 5 kelompok perlakuan terdiri atas 6 ekor mencit jantan. 3.2 Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium FMIPA Biologi USU, Balai Penyidikan dan Pengujian Veteriner (BPPV) Medan, dan Laboratorium Klinik Pramita Medan selama 3 bulan yaitu 09 Juni – 15 Agustus 2008. 3.3 Rancangan Penelitian Pada penelitian ini sampel terdiri dari 30 ekor mencit jantan yang di bagi secara acak dalam 5 kelompok masing-masing tiap kelompok dengan nama K, P, C1, C2, dan C3 a. Penentuan dosis plumbum Dalam penelitian ini dosis Pb asetat yang diberikan adalah 20 mg/kgBB/hari dalam bentuk serbuk kemudian di larutkan dengan aquadest kemudian di masukkan langsung ke lambung mencit dengan menggunakan spuit 1cc secara intraperitoneal

28 Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

b. Penentuan dosis vitamin C Dalam penelitian ini dosis vitamin C yang diberikan bervariasi yaitu 200, 500, dan 1000 mg/kgBB/hari dalam bentuk serbuk kemudian dimasukkan langsung ke lambung mencit dengan menggunakan jarum gavage peroral. 3.4 Populasi Penelitian Populasi dalam penelitian ini adalah mencit ( Mus musculus L ), jenis kelamin jantan, dewasa.

3.5 Sampel Penelitian Sampel yang digunakan adalah mencit ( Mus musculus L ), jenis kelamin jantan, dewasa, usia 6 – 8 minggu, dengan berat badan berkisar 20 – 30g dan kondisi sehat fisik. Penentuan sampel pada penelitian ini di gunakan rumus Federer (1963) : (t-1) (n-1) ≥ 15

t = kelompok perlakuan ( 5 kelompok ) n = jumlah sampel tiap kelompok

Banyaknya sampel yang di butuhkan dalam penelitian ini adalah : (t-1) (n-1) ≥ 15 4n-4 ≥ 15 n≥5 Jumlah sampel yang digunakan dalam penelitian ini sebanyak 30 ekor yang terdiri atas 6 ekor kelompok kontrol dan 24 ekor kelompok perlakuan.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

3.6 Variabel Yang Diteliti 3.6.1 Variabel Independent 1. Vitamin C 2. Plumbum 3.6.2 Variabel Dependent 1. Kadar Ureum 2. Kadar Kreatinin 3. Gambaran histopatologis ginjal 3.6.3 Variabel Kendali 1. Hewan coba 2. Jenis kelamin hewan coba 3. Umur hewan coba 4. Berat badan hewan coba 5. Kesehatan fisik hewan coba 6. Faktor lingkungan laboratorium untuk pemeriksaan 3.7 Bahan 1. Sediaan timbal asetat dalam bentuk bubuk (C4H6O4Pb) produksi Merc, Jerman diencerkan dengan aquadest hingga mencapai konsentrasi 1,6 mg/ml diberikan dengan dosis 20 mg/kgBB 2. Vitamin C dalam bentuk bubuk produksi Merc, Jerman diencerkan dengan aquadest dengan dosis 200 mg/kgBB (konsentrasi 10 mg/ml) , 500 mg/kgBB (konsentrasi 30 mg/ml) , dan 1000 mg/kgBB (konsentrasi 50 mg/ml)

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

3. Buffer Neutral Formalin (BNF) 4. Pellet Produksi PT. Mabar, Medan 5. Sekam 6. Parafin 7. Reagen pemeriksaan Ureum : a. Capso Buffer : 5 mmol/l, pH 9,65 ; NADH ≥0,23 mmol/L b. Bicin Buffer : 1000 mmol/l, pH 7,6; Urease ≥120 ukat/L; GLDH ≥ 150 ukat/L; α-ketoglutarat ≥ 8,3 mmol/L 8. Reagen Pemeriksaan Kreatinin : a. Sodium Hydroxide : 0,20 mol/L b. Asam pikrat : 25 mmol/L 3.8 Alat 1. Kandang pemeliharaan mencit berupa kandang plastik dengan penutup berupa kawat 2. Spektrofotometer (Microlab-300) produksi Merck yang telah diprogram. 3. Alat sentrifugasi : Hitachi 912 4. Pipet 20 – 200 μl 5. Pipet 100 – 1000 μl 6. Cup Serum 7. Perangkat pembuatan sediaan histopatologi 8. Mikroskop cahaya 9. Kamera Foto

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

10. Timbangan hewan 11. Timbangan analitik 12. Spuit 1 cc dan 10 cc merk Terumo 13. Peralatan bedah hewan 14. Vial 15. Objek dan cover glass 16. Waterbath

3.9 Pelaksanaan Penelitian 3.9.1 Pemeliharaan Hewan Percobaan Mencit jantan, umur 6-8 minggu, sehat dengan berat badan 20 – 40 gr. Kandang percobaan di bersihkan setiap hari untuk mencegah infeksi yang dapat terjadi akibat kotoran mencit tersebut. Kandang di tempatkan dalam suhu kamar dan cahaya menggunakan sinar matahari tidak langsung. Makanan hewan percobaan diberikan dalam bentuk pellet. Makanan dan minuman di berikan secukupnya dalam wadah terpisah dan dig anti setiap hari. 3.9.2 Persiapan Hewan Percobaan Masing-masing kelompok hewan percobaan di persiapkan dalam kandang yang terpisah. Mencit di pilih dan di pisahkan secara random dalam keadaan baik, disiapkan untuk beradaptasi selama 1 minggu sebelum dilakukan penelitian. Sebelum perlakuan, terhadap setiap mencit ditimbang berat badannya dan diamati kesehatannya secara fisik ( gerakannya, berat badan, makan dan

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

minum ). Jika ada mencit yang sakit pada saat adaptasi maka diganti dengan mencit yang baru dengan kriteria yang sama dan di ambil secara acak. 3.9.3. Perlakuan Hewan Percobaan Setelah persiapan selesai maka binatang percobaan kelompok K, P, C1, C2, dan C3 diberikan perlakuan sebagai berikut : a. Kelompok K adalah kelompok Kontrol yang tidak di induksi apapun, hanya di beri aquabidest b. Kelompok P adalah kelompok yang dipapar timbal asetat 20 mg/kg BB secara intraperitoneals c. Kelompok C1 adalah kelompok yang di beri vitamin C dengan dosis 200 mg/kg BB secara oral selama 7 hari. Satu jam seteleh pemberian vitamin C pada hari ke tujuh dilanjutkan dengan pemberian timbal asetat 20 mg/kg BB secara intraperitoneal. d. Kelompok ke C2 adalah kelompok yang diberi vitamin C dengan dosis 500 mg/kg BB secara oral selama 7 hari. Satu jam setelah pemberian vitamin C pada hari ke tujuh dilanjutkan dengan pemberian timbal asetat 20 mg/kg BB secara intraperitoneal. e. Kelompok ke C3 adalah kelompok yang diberi vitamin C dengan dosis 1000 mg/kg BB secara oral selama 7 hari. Satu jam setelah pemberian vitamin C pada hari ke tujuh dilanjutkan dengan pemberian timbal asetat 20 mg/kg BB secara intraperitoneal.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

f. Selanjutnya di lakukan pemeriksaan kadar ureum dan kreatinin darah pada mencit tiap kelompok penelitian, setelah dua hari pemberian Pb asetat, dan hari kedua percobaan untuk kelompok kontrol. g. Setelah itu hewan coba tersebut di bunuh secara dislokasi leher. Kemudian dilakukan pembedahan laparatomi untuk mengambil ginjal dan dibuat sediaan Patologi Anatomi (PA) h. Pemeriksaan histologis organ ginjal dilakukan untuk melihat adanya tandatanda degenerasi dengan metode Parafin dengan menggunakan pewarnaan Hematoksilin – Eosin (HE) . Jaringan ginjal diambil, kemudian segera difiksasi dalam larutan Buffer Neutral Formalin (BNF). Selanjutnya dibuat sediaan dengan metode parafin, lalu jaringan dipotong dengan mikrotom setebal 3-5 mikron, kemudian dilakukan pengecatan dengan hematoksilin Eosin yang akan menyebabkan inti berwarna kebiruan dan sitoplasma berwarna merah. Setelah itu dilakukan pemeriksaan histopatologis dengan menggunakan mikroskop cahaya dengan pembesaran 200 dan 400 kali untuk setiap sediaan. Preparat difoto dengan mikroskop kamera. i. Pengamatan histologis dilakukan secara mikroskopis, dalam hal ini peneliti di bantu oleh ahli Patologi Anatomi . j. Secara mikroskopis dinilai dengan menggunakan kriteria sebagai berikut.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Kriteria normal bila tidak ditemukan : 1. perdarahan intertubuler 2. kongesti 3. degenerasi pada tubuli 4. nekrosis 5. glomerulus menempel pada Capsula Bowman Selanjutnya kriteria tersebut dikuantifikasikan dengan skala sebagai berikut : 0

= tidak terjadi kerusakan jaringan ginjal

+ = ringan (terdapat sedikit tanda pada salah satu kriteria normal ) ++ = Sedang (terdapat beberapa tanda pada salah satu kriteria di atas) +++= Berat (terdapat banyak tanda pada salah satu kriteria di atas)

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

KERANGKA KERJA PEMELIHARAAN HEWAN COBA (TUJUH HARI)

Klp.I AQUADEST

Klp. II Pb 20mg/kg

Klp. III Vit.C 200mg/kg

Klp. IV Vit. C 500mg/kg

Klp. V VitC 1000mg/kg

TUJUH HARI Pb 20 mg/kg

DUA HARI

DUA HARI PEMERIKSAAN UREUM, KREATININ & HISTOPATOLOGIS UJI STATISTIK

Gambar 2. Kerangka Kerja 4. Prosedur Pemeriksaan Ureum Sampel darah pertama dikalibrasi dengan NaCl 0,9 % dan C.f.a.s ( Calibrator for automated systems ). Kalibrator dilarutkan dengan aquabidest dan di campur sampai homogen, dibagi dalam cup @ 200 μl kemudian disimpan di freezer pada suhu 2 – 8 ºC. Selanjutnya tekan Panel ” Calibration ”, tekan panel ” Status ” pilih parameter yang dikalibrasi ( BUN ), pilih metode kalibrasi ( 2 point ), tekan ”Ok”, dan tekan ”Start” 2 kali. Setelah dikalibrasi sampel di lakukan ” Quality Control ” dengan Bio Rad (Level 1 dan level 2) dengan program kontrol sebagai berikut :

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

1.

Pipet 300 μl Bio-Rad ke dalam cup serum dan letakkan pada rak kontrol yang telah di tentukan

2. Tekan panel ”QC” 3. Tekan panel ” Instal ” 4. Pilih jenis kontrol ( Bio-Rad) 5. Pilih parameter yang akan di kontrol ( BUN ), aktifkan 6. Tekan panel ” Active Test ” 7. Tekan ”Start ” 2 kali Selanjutnya untuk pemeriksaan kadar ureum, sampel yang telah diberi kode diletakkan pada raknya masing-masing ( Hitachi 912). Lalu tekan Start 2 kali, lalu dilakukan program yaitu dengan menekan panel “ WORKPLACE “, lalu tekan panel ” Test Selection ” dan tandai setiap sampel, lalu tekan “ Enter “ kemudian tekan panel pemeriksaan “BUN” , tekan panel “ Accept “, tekan “Start” 2 kali lalu Hitachi 912 secara otomatis menghitung konsentrasi BUN dalam darah dengan faktor konversi : a. mg/dl x 0,357 = mmol/l b. mg/dl urea x 0,467 = mg/dl ( BUN )

5. Prosedur Pemeriksaan Kreatinin Sampel darah pertama dikalibrasi dengan NaCl 0,9 % dan C.f.a.s ( Calibrator for automated systems ). Kalibrator dilarutkan dengan aquabidest dan di campur sampai homogen, dibagi dalam cup @ 200 μl kemudian disimpan di freezer pada suhu 2 – 8 ºC. Selanjutnya tekan Panel ” Calibration ”, tekan panel ” Status ” pilih

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

parameter yang dikalibrasi ( Kreatinin), pilih metode kalibrasi ( 2 point ), tekan ”Ok”, dan tekan ”Start” 2 kali. Setelah dikalibrasi sampel di lakukan ” Quality Control ” dengan Bio Rad (Level 1 dan level 2) dengan program kontrol sebagai berikut : 1.

Pipet 300 μl Bio-Rad ke dalam cup serum dan letakkan pada rak kontrol yang telah di tentukan

2. Tekan panel ”QC” 3. Tekan panel ” Instal ” 4. Pilih jenis kontrol ( Bio-Rad) 5. Pilih parameter yang akan di kontrol (Kreatinin ), aktifkan 6. Tekan panel ” Active Test ” 7. Tekan ”Start ” 2 kali Selanjutnya untuk pemeriksaan kadar kreatinin, sampel yang telah diberi kode diletakkan pada raknya masing-masing (Hitachi 912). Lalu tekan Start 2 kali, lalu dilakukan program yaitu dengan menekan panel “ WORKPLACE “, lalu tekan panel ” Test Selection ” dan tandai setiap sampel, lalu tekan “ Enter “ kemudian tekan panel pemeriksaan “Kreatinin” , tekan panel “ Accept “, tekan “Start” 2 kali lalu Hitachi 912 secara otomatis menghitung konsentrasi Kreatinin dalam darah dengan faktor konversi : mg/dl x 88,4 = μmol/l

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

6. Analisa Data Data yang diperoleh di analisa dengan menggunakan program computer SPSS 12. Selanjutnya dilakukan pengujian apakah ada perbedaan pengaruh proteksi vitamin C terhadap nilai kadar ureum dan kreatinin darah antara kelompok perlakuan dan kontrol dengan menggunakan “ Mann- Whitney Test “ dikarenakan data tidak berdistrbusi normal.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1. Deskripsi Hasil Penelitian Pemeliharaan mencit di mulai tanggal 09 Juni 2008 di Laboratorium FMIPA Biologi USU. Aklimatisasi mencit dilakukan selama 7 hari, selanjutnya diberi perlakuan baik pada kelompok kontrol maupun kelompok perlakuan. Pada pelaksanaan penelitian terdapat satu mencit hilang pada kelompok empat, tapi karena tidak mengganggu sampel yang dibutuhkan maka yang hilang tersebut tidak diganti.

Gambar 3. Pemeliharaan Hewan Coba

40 Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Selama pemeliharaan , berat badan dan aktifitas fisik setiap hewan coba terus diperhatikan. Untuk membedakan setiap mencit diberi tanda spidol pada ekornya.

Gambar 4. Penimbangan Berat Badan Hewan Coba Berat badan mencit di timbang setiap hari selama pelaksanaan penelitian.

Gambar 5. Pemberian Vitamin C Secara Oral Pemberian Vitamin C secara oral dengan dosis berbeda diberikan selama 7 hari untuk setiap mencit dengan menggunakan jarum gavage.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Gambar 6. Pemberian Plumbum Asetat Secara Intraperitoneal

Pemberian larutan Plumbum Asetat dosis 20 mg/kgBB secara intraperitoneal dilakukan 1 jam setelah pemberian vitamin C. Setelah 48 jam pemberian larutan Pb Asetat dilakukan pengambilan darah secara intraperitoneal, kemudian darah di campur dengan heparin dan dibiarkan ± 30 menit. Selanjutnya dilakukan laparatomi untuk mengambil ginjal. Setelah itu ginjal dimasukkan dalam larutan BNF.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Gambar 7. Pengambilan Darah Secara Intracardial

Semua perlakuan tersebut dilaksanakan di laboratorium FMIPA Biologi USU. Selanjutnya pemeriksaan kadar ureum dan kreatinin darah hewan coba langsung dibawa ke Laboratorium Klinik Pramita sedangkan pemeriksaan histopatologi dilaksanakan di Balai Penyidikan dan Pengujian Veteriner (BPPV) Medan dengan di bantu oleh tenaga yang ahli di bidangnya.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Gambar 8. Pembedahan Laparatomi Untuk Pengambilan Jaringan ginjal

4.2. Berat Badan Mencit Pada penelitian ini berat badan hewan coba ditimbang mulai dilakukan perlakuan dan selesai perlakuan seperti yang terlihat pada tabel 4.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Tabel 4. Berat Badan Rata-Rata Mencit Kelompok Kontrol dan Perlakuan Yang diberi Pb Asetat 20 mg/kgBB dan Vitamin C Dosis Berbeda No.

Kelompok

1. 2. 3. 4. 5.

Kontrol ( K ) Perlakuan ( P ) Vitamin C 200 (C1) Vitamin C 500 (C2) Vitamin C 1000 (C3)

Berat Badan Berat Badan Aklimatisasi ( g) Awal ( g) 26 31 26 32 26 32 24 29 32 33

Berat Badan Akhir (g) 32 30 30 29 35

Berat badan aklimatisasi adalah berat badan awal mencit dilakukan aklimatisasi. Setelah tujuh hari diaklimatisasi berat badannya ditimbang kembali yang disebut berat badan awal. Dari data berat badan awal terlihat bahwa terjadi peningkatan yang signifikan yang berarti mencit yang dipilih adalah sehat. Data berat badan akhir adalah data berat badan setelah di berikan perlakuan. Mencit pada kelompok kontrol mengalami peningkatan berat badan 1 kg selama 1 minggu. Mencit yang di beri plumbum asetat 20 mg/kg BB/hr dan vitamin C 200 mg mengalami penurunan 2 kg. Sedangkan mencit yang di beri vitamin C 500 mg berat badannya tetap dan yang diberi vitamin C 1000 mg terjadi peningkatan berat badan 2 kg.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Selanjutnya data berat badan dianalisis dengan data diperoleh sebagai berikut: Tabel 5. Berat Badan ( X ± SD ) Pada Lima Kelompok Perlakuan

No 1 2 3 4 5

Kelompok Perlakuan

n

Kontrol Negatif Kontrol Positif Vitamin C 200 mg + Pb 20 mg Vitamin C 500 mg + Pb 20 mg Vitamin C 1000 mg + Pb 20 mg

6 6 6 5 6

Berat Badan dan SD Sebelum Setelah Perlakuan Perlakuan ( X ± SD ) ( X ± SD ) 31,25 ± 3,30 31,95 ± 3,25 29,74 ± 3,40 29,62 ± 2,78 29,57 ± 4,04 30,70± 4,50 29,22 ± 4,01 28,77 ± 4,29 33,38 ± 3,05 35,63 ± 2,02

Nilai p 0,59 1,00 0,75 0,92 0,15

Dari tabel 5 dapat disimpulkan bahwa variabel yang dikendalikan yaitu berat badan tampak merata pada setiap kelompok perlakuan. Perbedaan rata-rata berat badan pada tiap kelompok perlakuan terjadi bukan karena perlakuan yang dilakukan tetapi pada saat aklimatisasi berat badan masing-masing mencit sudah berbeda. Ratarata berat badan mencit kontrol negatif : 31,25 gram. Rata-rata berat badan mencit kelompok kontrol positif sebelum perlakuan 29,738 gram dan pada akhir penelitian: 29,617 gram (turun 0,121 gram). Rata-rata berat badan mencit kelompok yang diberi 200 mg/kgBB dan Pb 20 mg sebelum perlakuan: 29,567 gram dan pada akhir penelitian 30,7 gram (naik 1,133 gram). Rata-rata berat badan mencit kelompok yang diberi 500 mg/kgBB dan Pb 20 mg sebelum perlakuan: 29,22 gram dan pada akhir penelitian 28,766 gram (turun 0,454 gram). Rata-rata berat badan mencit kelompok yang diberi 1000 mg/kgBB dan Pb 20 mg sebelum perlakuan: 33,383 gram dan pada akhir penelitian 35,633 gram (naik 2,25 gram).

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Hasil penelitian Hariono (2005) dengan pemberian 0,5 g Pb asetat netral/kg BB/oral/hr pada tikus putih ( Rattus Norvegicus ) selama 16 minggu terjadi penurunan BB yang signifikan ( P<0,05). Begitu juga rata-rata berat absolute hati, ginjal dan limpha terjadi penurunan signifikan dibandingkan kelompok kontrol. Pada penelitian tersebut juga dihasilkan kadar plumbum dalam ginjal lebih tinggi dari hati dan limpa. Hal ini dapat menyebabkan ginjal lebih beresiko daripada jaringan tubuh lain. Selanjutnya hasil pemeriksaan secara makroskopik pada minggu ke 14 dan 16 organ hati dan ginjal tampak pucat sedangkan organ lain normal. Secara mikroskopik pada minggu ke 12-16 epitel tubulus konvulatus proksimal ginjal terlihat degenerasi, hyperplasia, kariomegali dan pada minggu ke 8 terlihat benda-benda inklusi dalam inti sel. Terlihat pula vakuolisasi duktus kolektivus, dilatasi lumen disertai akumulasi sel debris dan pelebaran ruangan Bowman. Dari berbagai penelitian menunjukkan bahwa pemberian vitamin C dengan dosis tinggi dapat menanggulangi beberapa proses penyakit. Dengan pemberian vitamin C 500 mg bahkan 1000 mg dapat mengatasi infeksi virus. Dan dosis 200-500 mg juga dapat mengatasi kerusakan jaringan akibat berbagai logam berat ( Klenner, 1997). Penelitian Dawson, dkk menunjukkan vitamin C 1000 mg secara signifikan dapat menurunkan kadar Pb darah pada perokok. Adapun dosis optimal vitamin C sebagai antioksidan sangat tergantung derajat paparan radikal bebas ( Sanjoto,2001).

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

4.3 Kadar Ureum Darah Mencit Pada penelitian ini pengaruh pemberian vitamin C terhadap kadar ureum ginjal mencit yang dipapari plumbum disajikan pada : Tabel 6. Kadar Ureum ( X ± SD) Pada Lima Kelompok Perlakuan No.

n

Kontrol Perlakuan C1 C2 C3

Kadar Ureum (m g/dl)

1. 2. 3. 4. 5.

Kelompok Perlakuan

50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0

6 6 6 5 6

Kadar Ureum (mg/dl) ( X ± SD) 42.98 ± 6,30 41,93 ± 5,62 47,67 ± 6,59 34,06 ± 7,82 49,18 ± 19,40

49.18

47.67 42.98

P value ( < 0.05) 0,49 Pembanding 0,13 0,08 0,94

41.93 34.06

Kontrol

C1

C3

Kelompok Perlakuan Gambar 9. Kadar Ureum darah Mencit pada kelompok kontrol dan perlakuan

Dari gambar 9 kadar urea N/BUN pada semua kelompok hewan coba adalah normal, dimana nilai normalnya menurut Mitruka,1981 dan Loeb,1989 adalah 13,9-28,3 mg/dl. Demikian juga kadar ureum semua kelompok hewan coba adalah normal dan nilai normalnya adalah 2,14 x BUN.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Selanjutnya dengan analisa statistik kadar ureum pada kelompok kontrol dibandingkan kadar ureum sampel yang dipapari plumbum tidak di jumpai perbedaan yang bermakna diantara keduanya ( p > 0.05 ). Hal ini menunjukkan bahwa tidak ada pengaruh paparan plumbum terhadap kadar ureum darah. Demikian juga pemberian vitamin C dengan dosis bertingkat tidak terdapat perbedaan bermakna. Namun, dengan pemberian vitamin C 500 mg/dl kadar ureum jauh lebih kecil dibandingkan dosis yang lainnya. Berarti dosis yang tepat untuk menurunkan kadar ureum adalah 500 mg/dl walaupun penurunan yang dihasilkan tidak bermakna. Hasil penelitian Hariono (2005) dengan pemberian 0,5 g Pb asetat netral/kg BB/oral/hr pada tikus putih ( Rattus Norvegicus ) selama 16 minggu tidak terlihat perbedaan yang signifikan terhadap kadar Blood Urea Nitrogen (BUN), kreatinin, dan enzim alanin aminotransferase (ALT) tikus perlakuan maupun kontrol. 4.4 Kadar Kreatinin Darah mencit Pada penelitian ini kadar kreatinin darah mencit pada kelompok kontrol dan perlakuan adalah sebagai berikut : Tabel 7. Kadar Kreatinin ( X ± SD) Pada Lima Kelompok Perlakuan No. 1. 2. 3. 4. 5.

Kelompok Perlakuan Kontrol Perlakuan C1 C2 C3

n 6 6 6 5 6

KadarKreatinin (mg/dl) ( X ± SD) 0,78 ± 0,75 0,67 ± 0,14 0,47 ± 0,52 0,40 ± 0,00 0,53 ± 0,10

P Value ( < 0.05) 0,18 Pembanding 0.002 0.004 0.13

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Kadar Creatinin (mg/dl)

0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0

0.78 0.67 0.47

Kontrol

Perlakuan

C1

0.53 0.4

C2

C3

Kelompok Perlakuan

Gambar 10. Kadar Kreatinin Darah Mencit Pada Kontrol Dan Perlakuan Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa kadar kreatinin semua kelompok hewan coba adalah normal dimana nilai normalnya adalah 0,30 – 1,00. Kadar kreatinin kelompok kontrol dibandingkan mencit yang diberi plumbum asetat menunjukkan tidak ada pengaruh pemberian plumbum asetat terhadap kadar kreatinin. Sama halnya dengan penelitian Hariono ( 2005 ). Demikian juga hasil uji statistik yang dilakukan tidak terdapat perbedaan yang bermakna ( p > 0,05 ). Salah satu yang dapat mempengaruhi data tersebut adalah kemungkinan dosis plumbum asetat yang diberi perlu ditingkatkan dan lama paparan perlu ditambah. Sedangkan pemberian vitamin C dengan dosis bertingkat juga tidak menunjukkan peranan yang berarti dalam menurunkan kadar kreatinin karena masih dalam taraf normal kadarnya. Walaupun secara statistik terdapat perbedaan yang bermakna pada dosis 200 dan 500 mg (p < 0,05). Dan hal ini dapat disimpulkan bahwa pemberian vitamin C dapat mempengaruhi penurunan kadar kreatinin.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Gambaran Histologis Ginjal Mencit Pada Kelompok Kontrol Dan Perlakuan

Gambar 11. Kelompok Kontrol Sel Ginjal

Gambar 12.A. Kelompok Perlakuan 20 mg Pb Asetat

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

2. degenerasi pada tubuli (++). 3. nekrosis (++) 4. glomerulus menempel pada Capsula Bowman (++).

Gambar 12.B. Kelompok Perlakuan 20 mg Pb Asetat

1. Perdarahan intertubuler (+), 2. Kongestidan degenerasi (+). 3. Glomerulus tidak menempel pada Capsula Bowman.

Gambar 13. Kelompok Pemberian Pb 20 mg dan Vitamin C 200 mg

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

1. Perdarahan intertubuler (+), 2. Degenerasi pada tubuli (+++). 3. Glomerulus menempel pada Capsula Bowman.

Gambar 14. Kelompok pemberian Pb 20 mg dan vitamin C 500 mg

1. perdarahan intertubuler (+), 2. degenerasi pada tubuli (+).

Gambar 15. Kelompok pemberian Pb 20 mg dan vitamin C 1000 mg Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa sel ginjal mencit pada kelompok kontrol tampak normal dan terdapat sedikit perdarahan yang bukan dikarenakan terpapar plumbum. Pada mencit yang diberi Plumbum asetat 20 mg sel ginjal mengalami perdarahan intertubuler yang cukup besar, terjadi kongesti, oedema, degenerasi pada tubuli dan glomerulus menempel pada Capsula Bowman dan sel jaringan ginjal sudah mengalami nekrosis.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Menurut Goyer & Rhyne, 1973 kerusakan awal yang terjadi pada ginjal akibat terpapar Pb baik secara akut ataupun kronis adalah pada tubulus ataupun tubulo intertisial ginjal. Sel-sel pada tubulus mengalami kerusakan yang ditandai dengan menurunnya fungsi resorpsi pada ginjal. Penelitian Victery, dkk ( 1982 ) melaporkan efek toksik Pb pada level minimal terhadap tikus terlihat pada penurunan aktivitas plasma renin. Penelitian yang dilakukan oleh Anggraini (2008) dengan melihat gambaran makroskopis dan mikroskopis Hati dan Ginjal mencit akibat pemberian Pb Asetat 100 mg/kg BB secara oral ternyata derajat kerusakan ginjal terjadi lebih awal dibandingkan jaringan hati. Kerusakan ginjal sudah mulai terlihat pada minggu ke empat peneitian yaitu terjadi degenerasi, vakuolisasi lumen tubulus sebesar 20 %. Dan pada minggu ke 16 kerusakan yang terjadi ditandai dengan pelebaran lumen tubulus, pelebaran ruang Bowman, hiperplasi, vakuolisasi lumen, degenerasi, akumulasi sel radang dan akumulasi sel debris dalam lumen. Menurut Jones,dkk(1997) toksisitas Pb terhadap hewan dapat di pengaruhi oleh beberapa faktor antara lain : usia, spesies, keadaan reproduksi, kadar Pb yang masuk, bentuk Pb, hadirnya beberapa racun dan penyakit lain yang dapat mempertinggi toksisitas dan pengaruh hormonal. Dan tidak menutup kemungkinan komposisi nutrisi makanan yang dikonsumsi hewan coba perlu juga diperhatikan. Selanjutnya pada perlakuan pemberian vitamin C dengan dosis berbeda terlihat bahwa pemberian vitamin C 1000 mg/kgBB lebih tepat untuk mencegah kerusakan ginjal.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan Pada penelitian ini diperoleh kesimpulan sebagai berikut : 1. Pemberian Plumbum asetat dengan dosis tunggal 20 mg/kg BB secara intraperitoneal tidak berpengaruh terhadap kadar ureum dan kreatinin.Namun menyebabkan kerusakan sel ginjal secara signifikan. Hal ini dibuktikan dengan lebih beratnya nekrosis sel ginjal. 2. Pemberian vitamin C tidak menunjukkan perbedaan yang bermakna terhadap kadar ureum darah namun, kadar ureum dengan pemberian vitamin C 500 mg/kgBB lebih rendah dari dosis lainnya. 3. Pemberian vitamin C dosis 200 dan 500 mg/kgBB menunjukkan pengaruh yang signifikan terhadap penurunan kadar kreatinin darah. 4. Pemberian vitamin C sebagai upaya preventif dalam mencegah kerusakan sel ginjal yang diakibatkan oleh Pb menunjukkan hasil yang bermakna. Hal ini terlihat dari menurunnya tingkat kerusakan ginjal pada pemeriksaan histopatologis bila dibandingkan dengan kelompok yang hanya diberi Pb. 5. Pada pemeriksaan histopatologis didapati dosis vitamin C 1000 mg/hari sebagai dosis optimal dalam melindungi sel ginjal agar tidak terjadi perdarahan intertubuler, degenerasi dan nekrosis.

55 Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

5.2 Saran 1. Sebaiknya dilakukan penelitian lebih lanjut dengan peningkatan dosis dan lamanya paparan Pb,sehingga kerusakan organ lebih jelas terlihat. 2. Perlu ditingkatkan suplemen vitamin C bagi para pekerja yang cenderung terpapar plumbum untuk menjaga kesehatan.

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

DAFTAR PUSTAKA

Alexander, F.W., Delves, H.T. and Clayton, B.E. (1973). The Uptake and Secretion by Children of Lead and Other Contaminants. In: Proceedings of International symposium; Environmental Health Aspects of Lead, Amsterdam, Luxembourg, Comission of the European Communities, pp.319-330. Anggraini D.R., 2008. Gambaran Makroskopis Dan Mikroskopis Hati Dan Ginjal Mencit Akibat Pemberian Plumbum Asetat, Sekolah Pasca Sarjana Universitas Sumatera Utara ; 42-46. Ardyanto D., 2005. Deteksi Pencemaran Timah Hitam (Pb) Dalam darah Masyarakat Yang Terpajan Timbal (Plumbum), Jurnal Kesehatan Lingkungan ;2(1):67-76 Arief

S., 2006. Radikal Bebas, Bagian Unair/RS.Dr.Sutomo, Surabaya.

Ilmu

Kesehatan

Anak

FK

Aykin-Burns,N., Laegeler, A., Kellogg, G., Ercal, N.,2003. Oxidative Effects of Lead in Young & Adult fisher 344 Rats , Arch Environm Contam. Toxicol, 44 : 417-420 Bartik , M. (1981). Veterinary Toxicology, Elsevier Scientific. Publ. Co., New York, pp. 108-118 Dawson E.B,Evans D.R, Harris WA,Teter MC, Mc Ganity WJ., 1999. The Effect of Ascorbic Acid Supplementation on The Blood Lead Levels of Smokers, Journal of The American College of Nutrition;18(2):166-70 De Ross F.J., 1997. Smelters & Metal Reclaimens. In Occupational, Industrial, and Environmental Toxicology. New York : Mosby-year Book, 291-330 Ding, Y., Gonick, HC., Vaziri, N.D., 2000. Lead promotes hydroxyl Radical generation & Lipid Peroxidation in Cultured Aortic Endothelial Cells. Am.J.Hypertens.13 :552-555

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Ercal,N.,Gurer,H.,Aykin-Burns,N., 2001.Toxic metals & Oxidative Stress.Part 1. Mechanisms Involved in Metal Induced Oxidative Damage. Curr Top med Chem 1:529-539 Goldstein BD & HM Kipen., 1994. Hematologic Disorder. In Levy & Wegman (eds) 57 Occupational Health Recognizing & Preventing Work-Realted Diseases.3 rd ed. United Stated of America: Little Brown & Company Goodman,S.1995.Ester-C : Vitamin C Generasi III. Cetakan Ketiga. Penerbit Gramedia Pustaka Utama : 97-100 Goyer, R.A. and Rhyne, B.C.( 1973 ). Pathological effects of lead. Int.Rev.exp.Pathol., 12:1-77 Gultekin F, Delibas N, Yasar S & Kilinc I (2001). In vivo changes in antioxidant systems and protective role of melatonin and a combination of vitamin C and vitamin E on oxidative damage in erythrocytes induced by chlorpyrifos-ethyl in rats. Arch Toxicol 75, 88-96 Haliwell B, Free Radicals, Antioxidants and Human Disease: Curiousity, Cause, and Consequences ?, Lancet 1994;344(10):721-4 Hariono B. (2005). Effect of inorganic lead administration in rats ( Rattus novergicus) J.Sain Vet. 23(2): 108-118 Hsu PC, Hsu CC, Liu MY,et al. Lead Induced changes in spermatozoa function and metabolism. J Toxicol Environ Health A 1998;55:45-64 Ivanova E, Ivanov B, Mechanisms of the Extracellular Antioxidant Defend, Exp Pathol and Parasitol. 4:49-59 Junqueira I.C., Carneiro, J., Kelley, R.O., alih bahasa, Jan Tambayong.(1995). Histologi Dasar. Edisi ke 8, Jakrta.EGC.:370-387 Krisnamurthy,S.,1983.The Intriguing J.Chem.Ed.,60:465-467

Biological

Role

of

Vitamin

E.

Klenner F. Significance of High Daily Intake of Ascorbic Acid In Preventive Medicine, Vitamin C in Medicine 1997;1(1) Mukono J.,Koeswadji H., Sugijanto,Laksminiwati E.(1991). Laporan Penelitian : Status Kesehatan & kadar Pb ( timah hitam ) Darah Pada Karyawan SPBU di Jawa Timur. Lembaga Penelitian Universitas Airlangga

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Murray RK, Graner DK, Mayes PA, Rodwell VW, Biokimia Harper, Edisi 24, EGC, Jakarta 2003:611-3 Nordberg G (1998), metal : Chemical Properties & Toxicity In : Stellman Jm (ed); Encyclopedia of Occupational health & Safety. 4 ed.geneva;ILO OSHA, Lead, Safety & Health Construction, www.OSHA.gov/SLTC/.2005 Packer L.,A.S.H.Ong,1998, Biological Oxidant & Antioxidant : Molecular Mechanism & Health Effects, AOCS Press, Campaign, Illinois : 119-121 Watson,R.R & Leonard,T.K.,1986.Selenium & Vitamin A, E, & C : Nutrients with Cancer Prevention Properties.J.Am.Diet Ass,86:505-510 Palar H, Pencemaran & Toksikologi Logam Berat, Rineka Cipta, Jakarta, 1994: 74-93 Patra RC, Swarup D & Dwivedi SK (2001). Antioxidant effect of alphatocopherol, ascorbic acid and L-methionine on lead induced oxidative stress to the liver, kidney and brain in rats. Toxicol 162, 81-88 Podmore ID, Griffiths HR, Herbert KE, Mistry N, Mistry P, Lunec J, Vitamin C Exhibits Prooxidant Properties, Nature 1997;392 Robbins, S.L., dan Kumar,V.(1995). Buku Ajar Patologi I. Edisi 4. Alih Bahasa, Staf Pengajar Laboratorium Patologi Anatomi, FK Unair, Surabaya.EGC.Hal.304-305 Sanjoto P, (2001) Pengaruh Pemberian Vitamin C Terhadap Diameter Alveoli dan Pola Protein Jaringan Paru Tikus Yang Di papar Dengan Asap Rokok Kronis, Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang Sudarmaji, Mukono J.,Corie I.P.Toksikologi Logam Berat B3 dan Dampaknya terhadap Kesehatan, Jurnal kesehatan Lingkungan 2006; 2(2):129-142 Valverde, M., Fortoul, TI., Diaz-Barriga, F., Mejia, J., Rojas del Castillo, E. (2002). Genotoxicity induced in CD-1 mice by inhaled lead; Differential organ response. Mutagenesis. 17(1): 55-61 Venogopal, B., Luckey, T.D., (1978 ) . Metal Toxicity in Mammals 2 Chemical Toxicity of Metals and Metalloids. Olenum Press New York, London. Pp : 185-195

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Victery, W., Vaner, A.J., Shulak, J.M., Schoeps, P., and Julius, S. ( 1982 ). Lead, Hypertension and Renin Angiotensin System in Rats. J. Lab. Clin. Med., 99: 354-362. Vij AG, Satija NK, Flora SJ. Lead Induced Disorders in Hematopoietic and Drug Metabolizing enzyme system and their protection by ascorbic acid supplementation. Biomed Environ Sci 1998;11:7-14 WHO, World Health Organization, Lead Environmental health Criteria, no.3, Geneva,2002

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Lampiran 1 Master Data Kadar Ureum dan Kreatinin Perlakuan 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5 5

Ulangan 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 6

Ureum 40,4 49,6 46,5 44 31,7 45,7 38,9 40 43,7 51,6 42,7 35 36 56 48 48 47 51 27,1 41,2 24,9 41,8 35,3 70,6 75,4 30 47,8 35,6 35,7

Kreatinin 0,8 0,8 0,9 0,8 0,7 0,7 0,5 0,7 0,5 0,8 0,7 0,8 0,5 0,5 0,5 0,4 0,4 0,5 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,7 0,6 0,5 0,5 0,4 0,5

61 Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Lampiran 2 Hasil Analisa Statistik Dengan SPSS 12 Explore Case Processing Summary Cases Missing N Percent

Valid N Kadar Ureum Tiap Perlakuan

Percent 29

100,0%

0

Total N

,0%

Percent 29

100,0%

Descriptives Kadar Ureum Tiap Perlakuan

Mean 95% Confidence Interval for Mean

Lower Bound Upper Bound

5% Trimmed Mean Median Variance Std. Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis

Statistic 43,490 39,261

Std. Error 2,0642

47,718 42,794 42,700 123,570 11,1162 24,9 75,4 50,5 12,3 1,068 2,090

,434 ,845

Tests of Normality a

Kolmogorov-Smirnov Statistic df Sig. Kadar Ureum Tiap Perlakuan

,136

29

,185

Statistic ,922

Shapiro-Wilk df 29

Sig. ,035

a. Lilliefors Significance Correction

62 Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Explore Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan Case Processing Summary Cases Missing N Percent

Valid N Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan

Percent 29

100,0%

0

Total N

,0%

Percent 29

100,0%

Descriptives Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan

Mean 95% Confidence Interval for Mean

Lower Bound Upper Bound

Statistic ,576 ,514

Std. Error ,0300

,637

5% Trimmed Mean Median Variance Std. Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis

,569 ,500 ,026 ,1618 ,4 ,9 ,5 ,3 ,475 -1,233

,434 ,845

Tests of Normality a

Kolmogorov-Smirnov Statistic df Sig. Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan

,267

29

,000

Statistic ,856

Shapiro-Wilk df 29

Sig. ,001

a. Lilliefors Significance Correction

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Kadar Ureum Tiap Perlakuan NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Ureum Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

43,490

11,1162

24,9

75,4

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Ureum Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Kontrol Blank Vit C 500 + Pb Total

N 6 5 11

Mean Rank 7,67 4,00

Sum of Ranks 46,00 20,00

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Ureum Tiap Perlakuan 5,000 20,000 -1,826 ,068 ,082

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Ureum Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

43,490

11,1162

24,9

75,4

29

2,97

1,451

1

5

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Ureum Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Kontrol Blank Vit C 1000 + Pb Total

N 6 6 12

Mean Rank 6,33 6,67

Sum of Ranks 38,00 40,00

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Ureum Tiap Perlakuan 17,000 38,000 -,160 ,873 ,937

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Ureum Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

43,490

11,1162

24,9

75,4

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Ureum Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Kontrol Blank Kontrol Pb Total

N 6 6 12

Mean Rank 7,33 5,67

Sum of Ranks 44,00 34,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Ureum Tiap Perlakuan 13,000 34,000 -,801 ,423 ,485

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Ureum Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

43,490

11,1162

24,9

75,4

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Ureum Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Kontrol Blank Vit C 200 + Pb Total

N 6 6 12

Mean Rank 4,83 8,17

Sum of Ranks 29,00 49,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Ureum Tiap Perlakuan 8,000 29,000 -1,604 ,109 ,132

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Ureum Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

43,490

11,1162

24,9

75,4

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Ureum Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Kontrol Pb Vit C 200 + Pb Total

N 6 6 12

Mean Rank 5,00 8,00

Sum of Ranks 30,00 48,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Ureum Tiap Perlakuan 9,000 30,000 -1,444 ,149 ,180

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Ureum Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

43,490

11,1162

24,9

75,4

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Ureum Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Kontrol Pb Vit C 500 + Pb Total

N 6 5 11

Mean Rank 7,33 4,40

Sum of Ranks 44,00 22,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Ureum Tiap Perlakuan 7,000 22,000 -1,461 ,144 ,177

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Ureum Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

43,490

11,1162

24,9

75,4

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Ureum Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Kontrol Pb Vit C 1000 + Pb Total

N 6 6 12

Mean Rank 6,33 6,67

Sum of Ranks 38,00 40,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Ureum Tiap Perlakuan 17,000 38,000 -,160 ,873 ,937

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Ureum Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

43,490

11,1162

24,9

75,4

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Ureum Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Vit C 200 + Pb Vit C 500 + Pb Total

N 6 5 11

Mean Rank 8,17 3,40

Sum of Ranks 49,00 17,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Ureum Tiap Perlakuan 2,000 17,000 -2,379 ,017 ,017

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Ureum Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

43,490

11,1162

24,9

75,4

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Ureum Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Vit C 200 + Pb Vit C 1000 + Pb Total

N 6 6 12

Mean Rank 7,17 5,83

Sum of Ranks 43,00 35,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Ureum Tiap Perlakuan 14,000 35,000 -,642 ,521 ,589

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Ureum Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

43,490

11,1162

24,9

75,4

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Ureum Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Vit C 500 + Pb Vit C 1000 + Pb Total

N 5 6 11

Mean Rank 4,40 7,33

Sum of Ranks 22,00 44,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Ureum Tiap Perlakuan 7,000 22,000 -1,461 ,144 ,177

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

,576

,1618

,4

,9

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Kontrol Blank Kontrol Pb Total

N 6 6 12

Mean Rank 8,00 5,00

Sum of Ranks 48,00 30,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan 9,000 30,000 -1,526 ,127 ,180

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

,576

,1618

,4

,9

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Kontrol Blank Vit C 200 + Pb Total

N 6 6 12

Mean Rank 9,50 3,50

Sum of Ranks 57,00 21,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan ,000 21,000 -2,966 ,003 ,002

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

,576

,1618

,4

,9

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Kontrol Blank Vit C 500 + Pb Total

N 6 5 11

Mean Rank 8,50 3,00

Sum of Ranks 51,00 15,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan ,000 15,000 -2,909 ,004 ,004

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

,576

,1618

,4

,9

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Kontrol Blank Vit C 1000 + Pb Total

N 6 6 12

Mean Rank 9,33 3,67

Sum of Ranks 56,00 22,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan 1,000 22,000 -2,781 ,005 ,004

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

,576

,1618

,4

,9

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Kontrol Pb Vit C 200 + Pb Total

N 6 6 12

Mean Rank 8,83 4,17

Sum of Ranks 53,00 25,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan 4,000 25,000 -2,407 ,016 ,026

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

,576

,1618

,4

,9

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Kontrol Pb Vit C 500 + Pb Total

N 6 5 11

Mean Rank 8,50 3,00

Sum of Ranks 51,00 15,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan ,000 15,000 -2,894 ,004 ,004

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

,576

,1618

,4

,9

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Kontrol Pb Vit C 1000 + Pb Total

N 6 6 12

Mean Rank 8,17 4,83

Sum of Ranks 49,00 29,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan 8,000 29,000 -1,676 ,094 ,132

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

,576

,1618

,4

,9

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Vit C 200 + Pb Vit C 500 + Pb Total

N 6 5 11

Mean Rank 7,67 4,00

Sum of Ranks 46,00 20,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan 5,000 20,000 -2,182 ,029 ,082

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

,576

,1618

,4

,9

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Vit C 200 + Pb Vit C 1000 + Pb Total

N 6 6 12

Mean Rank 5,33 7,67

Sum of Ranks 32,00 46,00

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008

82

Test Statisticsb

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan 11,000 32,000 -1,261 ,207 ,310

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

NPar Tests Descriptive Statistics N Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan Perlakuan Tiap Kelompok

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

29

,576

,1618

,4

,9

29

2,97

1,451

1

5

Mann-Whitney Test Ranks Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan

Perlakuan Tiap Kelompok Vit C 500 + Pb Vit C 1000 + Pb Total

Test Statistics

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

N 5 6 11

Mean Rank 3,50 8,08

Sum of Ranks 17,50 48,50

b

Kadar Kreatinin Tiap Perlakuan 2,500 17,500 -2,516 ,012 a

,017

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan Tiap Kelompok

Bernike Doloksaribu: Pengaruh proteksi Vitamin C Terhadap Kadar Ureum, Kreatinin Dan Gambaran Histopatologis Ginjal Mencit Yang Dipapar Plumbum, 2008. USU e-Repository © 2008